詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用,,不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,!
細胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔表皮角質形成層細胞先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測
實驗室分離的兔表皮角質形成經PCK免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌、酵母和真菌等,。
產品名稱 | 兔表皮角質形成原代細胞 | 組織來源 | 皮膚 |
英文名稱 | Rabbit Epidermal Keratinocyte Cells | 貨號 | YS-01X8323 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
兔表皮角質形成細胞分離自皮膚組織,;表皮位于動物皮膚的外層,由胚胎時期外胚層形成,,具有抗摩擦和抗損傷的作用,。表皮是皮膚的淺層結構,由復層扁平上皮構成,。從基底層到表面可分為五層,,即基底層、棘層,、顆粒層,、透明層和角質層。表皮角質形成細胞是一種能合成角質蛋白的上皮細胞,,此類細胞為表皮的主體,,由表皮深層始逐漸增殖、分化,,并在成為角化的角質細胞中,,細胞核與細胞器消失,細胞亦失去生理功能而脫落,。未脫落部分對機體尚有保護作用,,故不必在洗擦身體時用力搓擦,使其過早脫失,。表皮角質形成細胞主要分布于表皮基底層,,在上皮程序性死亡后,細胞產生角化并移向表皮,。體外培養(yǎng)的表皮角化細胞容易導致終末分化,,不能充分增殖。角質形成細胞終產生角質蛋白,,在其向角質細胞演變過程中,,一般可以分為四層,即基底層,、棘層,、顆粒層以及角質層。有人把前三層或前二層稱為生發(fā)層或馬爾匹基層,。此外,,在某些部位,特別在掌跖部位,,角質層下方還可見到透明層,。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):上皮細胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔表皮角質形成細胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞培養(yǎng)方法:
1,、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,,每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,,每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,,再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,,封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
公司產品:
小鼠心肌細胞MCM | Anti-TWIST protein TWIST蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
ILK-1(Human integrin-linked kinase 1) ELISA Kit 人整合素連接激酶1 96T | Anti-MMP-14/FITC 熒光素標記基質金屬蛋白酶-14抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Thymosin beta 4 β4抗體 規(guī)格 0.2ml | ACE(Human Angiotensin converting enzyme) ELISA Kit 人血管緊張素轉化酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
HBZ: 血紅蛋白ζ鏈/Hemoglobin ζ 抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Cathepsin G/CTSG 組織蛋白酶G抗體 規(guī)格 0.1ml |
FOXD1: 叉頭蛋白D1抗體 0.2ml | Pro-ANP ELISA Kit 大鼠前心肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
EFNA5 Others Canine 狗 Ephrin-A5 / EFNA5 人細胞裂解液 (陽性對照) | Promocell C-28055 M1-Macrophage GenerationMedium DXF, M1-巨噬細胞生成培養(yǎng)基DXF 250ml |
人角膜上皮細胞裂解物HCEpiCL | CCL6 Others Mouse 小鼠 CCL6 / C-C motif ligand 6 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CD99 Others Mouse 小鼠 CD99 / PILR1 人細胞裂解液 (陽性對照) | MME Others Rat 大鼠 CD10 / Neprilysin / MME 人細胞裂解液 (陽性對照) |
Promocell C-27437 Preadipocyte DiffereiationMedium KIT, 前脂肪細胞分化培養(yǎng)基套裝 500ml | RT4(人膀胱移行細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 T-24(膀胱變移細胞癌) |
MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞 | 兔表皮角質形成原代細胞ACE(Human Angiotensin converting enzyme) ELISA Kit 人血管緊張素轉化酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
MGAT5 Others Human 人 MGAT5 / GG5 人細胞裂解液 (陽性對照) | 人關節(jié)軟骨細胞培養(yǎng)基 100mL |
IGFBP4 Protein Human 重組人 IGFBP4 蛋白 (His 標簽) | L6565小鼠白血病克隆細胞系 L6565 murine leukemia cell line RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS |
LTBR Others Rat 大鼠 LTBR / TNFRSF3 人細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-Rabbit Anti--mouse IgA/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗小鼠IgA抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
ox-LDL: 氧化低密度脂蛋白抗體 0.1ml | 人永生化淋巴細胞;CNLMG-B5538LC 人肝動脈平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL |
SOX22: 核轉錄因子SOX22抗體 0.2ml | CARM1: 蛋白精酸N甲基4抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Cy7 Cy7標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml | EFNA5 Others Canine 狗 Ephrin-A5 / EFNA5 人細胞裂解液 (陽性對照) |