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詳細(xì)介紹
兔背根神經(jīng)元原代細(xì)胞
兔背根元細(xì)胞分離自脊椎背根節(jié),；感覺母細(xì)胞發(fā)出軸突，呈束狀,，左右對(duì)稱地從管的背部進(jìn)入,，此時(shí)的脊節(jié)即改稱為背根節(jié)。系統(tǒng)基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是元,，即細(xì)胞,，其大小和外觀在中樞系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突,、軸突,。胞體又叫核周體，內(nèi)含絲,、微管,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個(gè)有明顯核仁的核,。一些大元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示,，在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀，稱為尼氏小體,。樹突和軸突是元的突起,，能在元之間傳遞電沖動(dòng),，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別,。脊髓背根節(jié)是周圍的主要傳入元,，是感覺信號(hào)傳導(dǎo)的中繼站。背根元細(xì)胞的獲取較為困難,，需要在盡可能短的時(shí)間內(nèi)通過解剖顯微鏡獲得一定量的背根節(jié)組織,。組織體外培養(yǎng)方法是當(dāng)代科學(xué)一項(xiàng)很有價(jià)值的研究手段，背根節(jié)富含周圍系統(tǒng)感覺元,，已廣泛用于軸突的導(dǎo)向及再生,、中樞及周圍系統(tǒng)的髓鞘形成、營(yíng)養(yǎng)因子作用及受體分布,、細(xì)胞衰老機(jī)制,、基因治療、組織工程等科學(xué)的研究,。
英文名稱 | Rabbit Dorsal Root Neuron Cells | 組織來源 | 脊髓 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8317 |
細(xì)胞形態(tài) | 元細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔背根神經(jīng)元細(xì)胞
組織來源：脊髓
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基：含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：元細(xì)胞樣
傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液：0.125%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔背根元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔背根元采用膠原酶-酶聯(lián)合消化法,、元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔背根元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠雪旺細(xì)胞MSC | Anti-Tubb3 微管蛋白β3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
CYP21B(Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase) ELISA Kit 人細(xì)胞色素P450c21B/21-羥化酶 96T | Anti-MMP-13 /FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶13抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Thymulin 抗體 規(guī)格 0.2ml | Flt-3L(Human FMS-like tyrosine kinase 3 ligand) ELISA Kit 人FMS樣酪激酶3配體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HEBP1： 血紅素結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Cathepsin H/CTSH 組織蛋白酶H抗體 規(guī)格 0.1ml |
Factor XI heavy chain： 11重鏈抗體 0.1ml | ER ELISA Kit 大鼠雌二醇受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
IL1R1 Others Rat 大鼠 IL1R1 / CD121a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Gibco 10902088 Sf-900 II SFM 1000ml |
人角膜細(xì)胞總RNAHK NA | 小鼠顆粒元(MGC)(1×106) |
HA Others H16N3 甲型流感 H16N3 (A/black-headed gull/Sweden/5/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CD40LG Others Mouse 小鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
TNFRSF8 Others Human 人 TNFRSF8 / CD30 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | HPrSMC Pellet 人類前列腺平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNAHA cDNA |
MiaPaCa-2, 人胰腺癌細(xì)胞 | 兔背根神經(jīng)元原代細(xì)胞Flt-3L(Human FMS-like tyrosine kinase 3 ligand) ELISA Kit 人FMS樣酪激酶3配體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
大鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞(RAc)(5×105) Ishikawa, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 Human | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-Swiss albino |
二氫還原酶缺陷型中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CHO/dhFr- | HFF細(xì)胞,，小兒細(xì)胞 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞,SH2細(xì)胞 星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基AM |
TF Others Sus scrofa (Pig) 野豬 ansferrin / TF 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | sIgA/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人分泌型IgA抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Osteocalcin： 骨鈣蛋白/骨鈣素抗體 0.1ml | DKK1 Others Rhesus 恒河猴 DKK-1 / Dkk1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
Sox3： 轉(zhuǎn)錄因子Sox3抗體 0.2ml | phospho-CARM1(Ser228)： 0酸化蛋白精酸N甲基4抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/FITC FITC標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.3ml | IL1R1 Others Rat 大鼠 IL1R1 / CD121a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
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