詳細(xì)介紹
兔瘢痕疙瘩成纖維原代細(xì)胞
兔瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞分離自皮膚瘢痕疙瘩組織,;瘢痕疙瘩,俗稱疤痕疙瘩,,是皮膚傷口愈合或不明原因所致皮膚損傷愈合后所形成的過度生長的異常瘢痕組織,,目前學(xué)術(shù)界認(rèn)為各種原因?qū)е碌鸟:廴缇哂幸韵绿攸c(diǎn),可診斷為瘢痕疙瘩:①病變超過原始皮膚損傷范圍,;②呈持續(xù)性生長,;③高起皮膚表面、質(zhì)硬韌,、顏色發(fā)紅的結(jié)節(jié)狀,、條索狀或片狀腫塊。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),,其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起,;6h后細(xì)胞基本貼壁,,伸展成梭形,胞核清晰,,分布較均勻,,散在生長,不聚集成團(tuán),;細(xì)胞生長迅速,,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,,平坦、胞體較大,,細(xì)胞質(zhì)透明,,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,,顏色淡,。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞同正常皮膚成纖維細(xì)胞在形態(tài)上沒有表現(xiàn)出明顯的差異。瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生長同正常皮膚成纖維細(xì)胞的生長沒有明顯的差別,。癜痕成纖維細(xì)胞對血清的依賴性低于正常皮膚成纖維細(xì)胞,。
英文名稱 | Rabbit Keloid Fibroblast Cells | 組織來源 | 皮膚 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8316 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞
組織來源:皮膚
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
兔瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔瘢痕疙瘩成纖維采用先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔瘢痕疙瘩成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
小鼠原B細(xì)胞株;BaF3 小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | PDH E1(Mouse pyruvate dehydrogenase-E1) ELISA KIT 小鼠酸脫氫酶E1 96T |
Phospho-Rictor (Thr1135): 0酸化雷帕靶蛋白復(fù)合體2抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh Pumilio 1 PUM1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-CD36L1/SRB1 /FITC 熒光素標(biāo)記高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | C17orf49: 17號染色體開放閱讀框49抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Brain protein CG6 腦蛋白CG6抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CXCL7/NAP-2/PPBP/FITC 熒光素標(biāo)記粒細(xì)胞趨化蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
原纖維蛋白1抗體 Anti-FBN1 0.1ml | Acidic Calponin: 酸性鈣調(diào)蛋白3抗體 0.2ml |
人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs) Human | 小型豬腎細(xì)胞;MPK |
H125細(xì)胞,人肺癌細(xì)胞 小鼠脂肪細(xì)胞,L13T3細(xì)胞 CM-R111大鼠雪旺氏細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | RSC96(大鼠雪旺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人成纖維細(xì)胞RNAHMF miRNA5 μg | 人正常肝細(xì)胞;L-02 |
CM-M098小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | CL-0106HFL1(人肺成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
兔源細(xì)胞 長鼻袋鼠腎細(xì)胞,,Pt K1細(xì)胞 RBL-1細(xì)胞,,大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞 | 兔瘢痕疙瘩成纖維原代細(xì)胞C17orf49: 17號染色體開放閱讀框49抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO E6 | tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);P19-CAG-tTA-1F3 彈(含10mL酶解緩沖液) 1mL |
CD38 Others Human 人 CD38 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | MCF 7B(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
大鼠雪旺氏細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GRM3 促代謝型谷受體M3抗體 規(guī)格 0.2ml | 人絨毛間葉成纖維細(xì)胞cDNAHVMF cDNA |
ERK1 + ERK2: 原活化蛋白激酶1/2抗體 0.1ml | Anti-Lxn 羧肽酶抑制劑抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
GATA4Mouse GATA binding protein 4) ELISA Kit 小鼠GATA結(jié)合蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格: 48T | 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs) Human |