詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔Ⅱ型肺泡上皮采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化結(jié)合差速貼壁法,并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔Ⅱ型肺泡上皮經(jīng)SP-C免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔Ⅱ型肺泡上皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 肺 |
英文名稱 | Rabbit Alveolar Type II Epithelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X8315 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞分離自肺組織,;肺泡由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反復(fù)分枝成無(wú)數(shù)細(xì)支氣管,,它們的末端膨大成囊,,囊的四周有很多突出的小囊泡,即為肺泡,。小肺泡細(xì)胞,,又稱I型肺泡細(xì)胞,厚約0.1微米,,基底部是基底膜,,無(wú)增殖能力。大肺泡細(xì)胞,又稱Ⅱ型肺泡細(xì)胞,,分泌表面活性物質(zhì)(二棕櫚酰),,以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細(xì)胞位于Ⅰ型肺泡細(xì)胞之間,,數(shù)量較Ⅰ型肺泡細(xì)胞多,,但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細(xì)胞小。細(xì)胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔,。細(xì)胞核圓形,,胞質(zhì)著色淺、呈泡沫狀,。電鏡下,,細(xì)胞游離而有少量微絨毛,胞質(zhì)內(nèi)富含線粒體和溶酶體,,有較發(fā)達(dá)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體,。核上方有較多的分泌顆粒,電子密度高,、大小不等,,直徑約0.1-1.0μm顆粒內(nèi)含有平行排列的板層狀結(jié)構(gòu),稱為嗜餓性板層小體,。小體內(nèi)的主要成分為磷脂,,以二棕櫚酰為主,此外還有糖胺多糖及蛋白質(zhì)等,。顆粒內(nèi)物質(zhì)釋放出來(lái)后,,在肺泡表面形成一層粘液層,稱為表面活性物質(zhì)(surfactant),。表面活性物質(zhì)有降低肺泡表面張力,、穩(wěn)定肺泡大小的作用。呼氣時(shí)肺泡縮小,,表面活性物質(zhì)密度增加,,表面張力降低,防止肺泡過(guò)度塌陷,;吸氣時(shí)肺泡擴(kuò)張,,表面活性物質(zhì)密度減小,肺泡回縮力加大,,可防止肺泡過(guò)度膨脹,。表面活性物質(zhì)的缺乏或變性均可引起肺不張,過(guò)度通氣可造成表面活性物質(zhì)缺乏,;吸入毒氣可直接破壞表面活性物質(zhì),。Ⅱ型肺泡細(xì)胞有分裂,、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細(xì)胞的潛能,故具有修復(fù)受損傷上皮的作用,。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個(gè)瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時(shí)間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,,每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,,每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),,再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02 | Nociceptin: 孤肽/痛敏肽抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh MCHR/GPR24 G蛋白偶聯(lián)受體24抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-TSFP1/SP1 /FITC 熒光素標(biāo)記SP1轉(zhuǎn)錄生長(zhǎng)因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
SSTR3 peptide 受體3抗原 0.5mg | Anti-Os05g0477200 protein 水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml |
Anti-GAI3/FITC 熒光素標(biāo)記抑制型G蛋白α3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC25A11 線粒體二羧酸載體蛋白11抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-phospho-FAK(pTyr577)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化粘著斑激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Anti-ATF1/FITC 熒光素標(biāo)記活化復(fù)制因子1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
15. 視覺(jué)細(xì)胞系統(tǒng) | 人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞;WI-38 VA13亞系2RA 人直結(jié)腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞HCSMC | NRN1L Others Human 人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
FSTL3 Others Mouse 小鼠 FLRG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | KLRK1 Others Human 人 NKG2D / CD314 / KLRK1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
DU 145(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0230Tca-8113(人舌鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 敘利亞倉(cāng)鼠細(xì)胞系;Syrian Hamster AV12 | KIR2DL4 Others Human 人 KIR2DL4 / CD158D CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞 | 兔Ⅱ型肺泡上皮原代細(xì)胞Anti-Os05g0477200 protein 水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml |
FIGF Others Mouse 小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | A549, 人肺癌細(xì)胞系 Human |
破骨細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | Ana-1(小鼠巨噬細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R059大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 表達(dá)SV40T和EBNA1的人胚腎細(xì)胞;293ET |
UMNSAH/DF-1雞胚成纖維細(xì)胞 UMNSAH/DF-1 chicken embryo fibroblast DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | GGCX: γ-谷酰羧化酶抗體 0.2ml |
Human Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit 球蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格: 48T | EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
酸脫氫酶激酶4抗體 Anti-Pdk4 0.1ml | HDV IgM(Human Hepatitis D virus IgM) ELISA Kit 人丁型肝炎IgM 96T |
AGPHD1: 基糖苷類0酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 0.2ml | 15. 視覺(jué)細(xì)胞系統(tǒng) |