詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療!
細胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔Ⅱ型肺泡上皮采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化結(jié)合差速貼壁法,,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔Ⅱ型肺泡上皮經(jīng)SP-C免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔Ⅱ型肺泡上皮原代細胞 | 組織來源 | 肺 |
英文名稱 | Rabbit Alveolar Type II Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X8315 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
兔Ⅱ型肺泡上皮細胞分離自肺組織;肺泡由單層上皮細胞構(gòu)成的半球狀囊泡,。肺中的支氣管經(jīng)多次反復分枝成無數(shù)細支氣管,,它們的末端膨大成囊,囊的四周有很多突出的小囊泡,,即為肺泡,。小肺泡細胞,又稱I型肺泡細胞,,厚約0.1微米,,基底部是基底膜,無增殖能力,。大肺泡細胞,,又稱Ⅱ型肺泡細胞,分泌表面活性物質(zhì)(二棕櫚酰),,以降低肺泡表面張力,。Ⅱ型肺泡細胞位于Ⅰ型肺泡細胞之間,數(shù)量較Ⅰ型肺泡細胞多,,但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細胞小,。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細胞核圓形,,胞質(zhì)著色淺,、呈泡沫狀。電鏡下,,細胞游離而有少量微絨毛,,胞質(zhì)內(nèi)富含線粒體和溶酶體,有較發(fā)達的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復合體,。核上方有較多的分泌顆粒,,電子密度高、大小不等,,直徑約0.1-1.0μm顆粒內(nèi)含有平行排列的板層狀結(jié)構(gòu),,稱為嗜餓性板層小體。小體內(nèi)的主要成分為磷脂,,以二棕櫚酰為主,,此外還有糖胺多糖及蛋白質(zhì)等,。顆粒內(nèi)物質(zhì)釋放出來后,在肺泡表面形成一層粘液層,,稱為表面活性物質(zhì)(surfactant),。表面活性物質(zhì)有降低肺泡表面張力、穩(wěn)定肺泡大小的作用,。呼氣時肺泡縮小,,表面活性物質(zhì)密度增加,表面張力降低,,防止肺泡過度塌陷,;吸氣時肺泡擴張,表面活性物質(zhì)密度減小,,肺泡回縮力加大,,可防止肺泡過度膨脹。表面活性物質(zhì)的缺乏或變性均可引起肺不張,,過度通氣可造成表面活性物質(zhì)缺乏,;吸入毒氣可直接破壞表面活性物質(zhì)。Ⅱ型肺泡細胞有分裂,、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能,,故具有修復受損傷上皮的作用。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):上皮細胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔Ⅱ型肺泡上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法:
1,、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍,。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品:
小鼠胰腺癌細胞(B類);Pan02 | Nociceptin: 孤肽/痛敏肽抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh MCHR/GPR24 G蛋白偶聯(lián)受體24抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-TSFP1/SP1 /FITC 熒光素標記SP1轉(zhuǎn)錄生長因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
SSTR3 peptide 受體3抗原 0.5mg | Anti-Os05g0477200 protein 水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml |
Anti-GAI3/FITC 熒光素標記抑制型G蛋白α3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC25A11 線粒體二羧酸載體蛋白11抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-phospho-FAK(pTyr577)/FITC 熒光素標記抗0酸化粘著斑激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Anti-ATF1/FITC 熒光素標記活化復制因子1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
15. 視覺細胞系統(tǒng) | 人胚肺細胞VA13細胞;WI-38 VA13亞系2RA 人直結(jié)腸平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL |
人結(jié)腸平滑肌細胞HCSMC | NRN1L Others Human 人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
FSTL3 Others Mouse 小鼠 FLRG 人細胞裂解液 (陽性對照) | KLRK1 Others Human 人 NKG2D / CD314 / KLRK1 CHO細胞裂解液 (陽性對照) |
DU 145(人前列腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0230Tca-8113(人舌鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2 敘利亞倉鼠細胞系;Syrian Hamster AV12 | KIR2DL4 Others Human 人 KIR2DL4 / CD158D CHO細胞裂解液 (陽性對照) |
MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞 | 兔Ⅱ型肺泡上皮原代細胞Anti-Os05g0477200 protein 水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml |
FIGF Others Mouse 小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細胞裂解液 (陽性對照) | A549, 人肺癌細胞系 Human |
破骨細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | Ana-1(小鼠巨噬細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R059大鼠膀胱平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL 表達SV40T和EBNA1的人胚腎細胞;293ET |
UMNSAH/DF-1雞胚成纖維細胞 UMNSAH/DF-1 chicken embryo fibroblast DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | GGCX: γ-谷酰羧化酶抗體 0.2ml |
Human Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit 球蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格: 48T | EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細胞裂解液 (陽性對照) |
酸脫氫酶激酶4抗體 Anti-Pdk4 0.1ml | HDV IgM(Human Hepatitis D virus IgM) ELISA Kit 人丁型肝炎IgM 96T |
AGPHD1: 基糖苷類0酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 0.2ml | 15. 視覺細胞系統(tǒng) |