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詳細介紹
人子宮平滑肌原代細胞
人子宮平滑肌細胞分離自子宮組織,；子宮是孕育胎兒的器官,，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間,，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶,、盆膈,、尿生殖膈及會陰中心腱等結(jié)構(gòu)維持，這些結(jié)構(gòu)受損或松弛時，可以引起子宮脫垂,。子宮肌層比較厚,，由成束或成片的平滑肌組成，肌束間以結(jié)締組織分隔,。子宮平滑肌具有收縮功能,，收縮受激素的調(diào)節(jié)，其收縮活動有助于向輸卵管運送,、經(jīng)血排出以及胎兒娩出,。子宮平滑肌層含有大量的血管，如果平滑肌層細胞過度生長,，勢必造成血管壁的增厚,，管腔堵塞，體外培養(yǎng)平滑肌細胞有利于研究子宮和其他富含血管器官的血管形成機制,。子宮平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。子宮平滑肌細胞的主要功能：①子宮平滑肌能保持子宮的基本形態(tài),，在孕期能大化的擴張子宮容積，保證胎兒孕育環(huán)境,；②平滑肌細胞有收縮舒張能力,，在生產(chǎn)時能形成生理性的縮腹環(huán),，推動胎兒向下移動，輔助生產(chǎn),。
英文名稱 | Human Uterine Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 子宮組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7209 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人子宮平滑肌細胞
組織來源：子宮組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
方法簡介
公司實驗室分離的人子宮平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人子宮平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
小鼠胰腺癌細胞(B類);Pan02 | FFA ELISA Kit 大鼠游離脂肪酸Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
Collagen III： Ⅲ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白抗體 0.1ml | GABABRBP： G基B型受體結(jié)合蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CEACAM21 癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子21抗體 規(guī)格 0.2ml | PCDHA10/CNRN8： 鈣粘蛋白相關(guān)受體8抗體 0.2ml |
Anti-Phospho-NPM (Thr199) /FITC 熒光素標記0酸化核仁0酸蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | FGF4/HSTF1/HBGF-4(Fibroblast Growth Factor4) 纖維母細胞生長因子4抗原 0.5mg |
IgG/Gold 金標記兔抗人IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml | 9-Mar： 膜相關(guān)環(huán)指蛋白9抗體 0.2ml |
CEACAM1 Others Rat 大鼠 CEACAM1 / CD66a 人細胞裂解液 (陽性對照) | NETO1 Others Human 人 NETO1 / BTCL1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人結(jié)腸平滑肌細胞RNAHCSMC miRNA5 μg | TNFRSF13C Others Mouse 小鼠 BAFFR / TNFRSF13C / CD268 人細胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H209(人小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 MRC-5(胚肺細胞) | USP7 Others Human 人 USP7 / HAUSP (aa 208-560) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
IL10RB Others Human 人 IL10Rb 人細胞裂解液 (陽性對照) | 新生牛眼晶體上皮細胞;NBLE 人甲狀腺癌細胞,，SW579細胞 RIN-m5F細胞,，小鼠β胰島素瘤細胞 |
MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞 | 人子宮平滑肌原代細胞PCDHA10/CNRN8： 鈣粘蛋白相關(guān)受體8抗體 0.2ml |
CAL 27-EGFP-puro(pLVT7慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人舌鱗癌細胞 CAL 27-EGFP-puro (pLVT7 leiviral consuct stable sain) of human tongue squamous cell carcinoma DMEM+10% FBS+2μg/ml puromycin | 人結(jié)腸平滑肌細胞RNAHCSMC miRNA5 μg |
綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞;U14-GFP | Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 Protein (aa 1-725) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H209(人小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 MRC-5(胚肺細胞) | Anti-IL-16/FITC 熒光素標記白細胞介素-16抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-RXR gamma 維受體G抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CFSC-3H & 5H細胞，大鼠肝星形細胞 SK-N-SH(母細胞瘤) 大鼠垂體瘤細胞;GH3 |
Rhesus antibody Rh phospho-NDEL1(Ser231) 0酸化中心粒蛋白Nudel抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh Kir6.2 ATP敏感性通道亞基kir6.2抗體 規(guī)格 0.1ml |
PGE2 (Rabbit Prostaglandin E2) ELISA Kit 兔子前列腺素E2 96T | CEACAM1 Others Rat 大鼠 CEACAM1 / CD66a 人細胞裂解液 (陽性對照) |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
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