人子宮肌瘤組織源原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：兔原代關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞 中國倉鼠肺成纖維樣細(xì)胞 英文名稱： CHL-Don BHK-21[BHK21] 敘利亞倉鼠細(xì)胞 1ml/T75 人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL A549/T 人肺癌耐藥株 人原代腎小球內(nèi)皮細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的癌組織源采用膠原酶消化,、經(jīng)Percoll離心純化制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人子宮肌瘤組織源經(jīng)檢測,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡介：

人子宮肌瘤組織源細(xì)胞分離自癌組織；癌（cancer）是指起源于上皮組織的惡性腫瘤,，是惡性腫瘤中常見的一類,。相對應(yīng)的，起源于間葉組織的惡性腫瘤統(tǒng)稱為肉瘤,。有少數(shù)惡性腫瘤不按上述原則命名,，如腎母細(xì)胞瘤、惡性畸胎瘤等,。一般人們所說的“癌癥"習(xí)慣上泛指所有惡性腫瘤,。癌癥具有細(xì)胞分化和增殖異常、生長失去控制,、浸潤性和轉(zhuǎn)移性等生物學(xué)特征,，其發(fā)生是一個多因子、多步驟的復(fù)雜過程,，分為致癌,、促癌、演進(jìn)三個過程,，與吸煙,、感染、職業(yè)暴露,、環(huán)境污染,、不合理膳食、遺傳因素密切相關(guān),。癌細(xì)胞,，是一種變異的細(xì)胞，是產(chǎn)生癌癥的病源,。癌細(xì)胞與正常細(xì)胞不同,，有無限增殖、可轉(zhuǎn)化和易轉(zhuǎn)移三大特點,，能夠無限增殖并破壞正常的細(xì)胞組織,。癌細(xì)胞除了分裂失控外（能進(jìn)行多極分裂），還會局部侵入周圍正常組織甚至經(jīng)由體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到身體其他部分,。分惡性和良性兩種,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：