人支氣管平滑肌原代細胞公司出售的產(chǎn)品：人原代子宮成纖維細胞 BABL/C小鼠胚胎成纖維細胞 英文名稱： BABL/3T3 BFR-K1 大額牛細胞 1ml/T75 人實質(zhì)細胞培養(yǎng)基 100mL V79 中國倉鼠肺細胞 人原代小氣道上皮細胞

本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的人支氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人支氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等。

 

細胞簡介：

人支氣管平滑肌細胞分離自支氣管組織,；支氣管（Bronchi）,，是指由支氣管分出的各級分枝，由支氣管分出的一級支氣管,，即左,、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較,，前者較細長,，走向傾斜,；后者較粗短,，走向較前者略直，所以經(jīng)支氣管墮入的異物多進入右主支氣管,。支氣管和支氣管還有以區(qū)別就是,，支氣管是以“C"型的支氣管軟骨為支架，而支氣管不是,。支氣管平滑肌細胞主要功能：①支氣管平滑肌細胞能維持支氣管張力,，保持支氣管形態(tài)；②支氣管平滑肌特異的超微結(jié)構(gòu)特點和調(diào)節(jié)機制是支氣管正常生理功能的基礎(chǔ),；③支氣管平滑肌通過分泌細胞因子和趨化因子等促炎介質(zhì),，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。支氣管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形，核卵圓形,、居中,；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏,；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細胞培養(yǎng)方法：

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：