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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的人真皮毛乳頭采用膠原酶 - 蛋白酶混合消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的人真皮毛乳頭經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人真皮毛乳頭原代細(xì)胞 | 組織來源 | 毛囊 |
英文名稱 | Human Dermal Hair Papilla Cells | 貨號 | YS-01X8312 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人真皮毛乳頭細(xì)胞分離自皮膚毛囊組織,；毛囊是表皮細(xì)胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進(jìn)的真皮毛乳頭,，中心是一根毛發(fā),，立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上，附著點(diǎn)的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸,，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔,。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度,，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘,，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個(gè)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織。毛囊實(shí)際上是由結(jié)締組織和上皮兩部分所組成,，除了具有結(jié)締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外,，毛囊其余部分都是由表皮細(xì)胞分化而來,。真皮毛乳頭細(xì)胞位于毛囊基底部，是一類成纖維細(xì)胞,。在毛囊發(fā)育早期,，真皮細(xì)胞向單層上皮細(xì)胞發(fā)出第一真皮信號，刺激上皮局部形成毛基板,。隨后毛基板細(xì)胞向下方的真皮發(fā)出第一表皮信號,，誘導(dǎo)其形成有成纖維細(xì)胞組成的凝集細(xì)胞團(tuán)。在此過程中,，毛母質(zhì)細(xì)胞逐漸包裹凝集細(xì)胞團(tuán),，形成成熟的真皮毛乳頭細(xì)胞。作為毛囊中的重要細(xì)胞群,，真皮毛乳頭細(xì)胞的分子機(jī)制和臨床應(yīng)用正在被逐漸認(rèn)識和解析,。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基：含FBS、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：梭形,、多角形
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2，5%
人真皮毛乳頭細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
SP2/0, 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NEI-H209細(xì)胞 ECV304(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株) | Rhesus antibody Rh Gephyrin 橋尾蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
TIMP-4(Human tissue inhibitors of metalloproteinase 4) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.5ml |
IRS-3： 胰島素受體底物-3抗體 0.2ml | PAI ELISA Kit 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子 96T |
Rhesus antibody Rh RFPL4B/RNF211 環(huán)指蛋白211抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Phospho-Lck (Tyr505) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-SYT1(Thr202) 0酸化突觸結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml | RBP ELISA Kit 大鼠結(jié)合蛋白 96T |
小鼠成肌細(xì)胞;C2C12 | 人小腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
P388細(xì)胞，小鼠白血病細(xì)胞 空腸彎曲桿菌 大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1 | CCL20 Protein Mouse 重組小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞;HK-2 | 敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21 |
CM-M065小鼠腎上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞裂解物HA-c L |
J774A1細(xì)胞,，單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞 人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞,NCI-H157細(xì)胞 CL-0444SNU-5(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人真皮毛乳頭原代細(xì)胞PAI ELISA Kit 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子 96T |
人肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角質(zhì)細(xì)胞生長培養(yǎng)基2型(即用型) 500ml |
MAG Others Human 人 MAG / GMA / Siglec-4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H071人腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
IFNG Protein Mouse 重組小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白 (His 標(biāo)簽) | Rhesus antibody Rh API2 凋亡抑制因子2抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-B Raf (Thr598)： 0酸化B-Raf抗體 0.1ml | 胎兒骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 Fetal bone marrow mesenchymal stem cells |
Anti-P/FITC 熒光素標(biāo)記Raf激酶抑制蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | phospho-PLB(Ser16+Thr17)： 0酸化心臟0蛋白抗體 0.1ml |
Anti-Cdc6/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞分裂周期蛋白6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 小鼠成肌細(xì)胞;C2C12 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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