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詳細介紹
人源NK原代細胞?細胞
人NK細胞分離自人外周血單個核細胞,；NK細胞即自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）是機體重要的免疫細胞,，不僅與抗腫瘤,、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發(fā)生,，能夠識別靶細胞,、殺傷介質(zhì)。NK細胞來源于骨髓淋巴樣干細胞,，其分化,、發(fā)育依賴于骨髓及胸腺微環(huán)境,，主要分布于骨髓、外周血,、肝,、脾、肺和淋巴結,。NK細胞不同于T,、B細胞，是一類無需預先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞的淋巴細胞,。由于NK細胞的殺傷活性無MHC限制,，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性,。NK細胞胞漿豐富,，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關,。NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現(xiàn)早,，在體外1小時、體內(nèi)4小時即可見到殺傷效應,。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞（包括部分細胞系）,、病毒感染細胞、某些自身組織細胞（如血細胞）,、寄生蟲等,，因此NK細胞是機體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素,，也參與第Ⅱ型超敏反應和移植物抗宿主反應,。
英文名稱 | Human Natural killer Cells | 組織來源 | 外周血 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7512 |
細胞形態(tài) | 短梭形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人源NK細胞
組織來源：外周血
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含IL-2、IL-15,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細胞形態(tài) 短梭形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
方法簡介
公司實驗室分離的人外周血NK采用取外周血,、通過密度梯度離心,、差速貼壁、細胞因子誘導法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人源NK經(jīng)CD56免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 | Anti-Tubulin-alpha 微管蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
STK(Human serine/threonine protein kinase) ELISA Kit 人絲酸/蘇酸蛋酸酶 96T | Anti-MMP-9/FITC 熒光素標記基質(zhì)金屬蛋白酶-9蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TIAM1 T淋巴瘤侵襲轉移誘導蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml | MMP-2/Gelatinase A(Human Matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
HSF2 binding protein： 熱休克因子2結合蛋白抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh CATSPER 陽離子通道相關蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-FOXO4 (Ser197)： 0酸化叉頭蛋白4抗體 0.1ml | Resistin ELISA Kit 大鼠抵抗素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
ALOX15B Others Human 人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | ADAM12 Others Human 人 ADAM12 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人結直腸腺癌細胞;HCT-8 [HRT-18] | FAM3C Others Human 人 FAM3C / ILEI 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/India/NIV33487/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) | NRBF2 Others Human 人 NRBF2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H292(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) | TIMP1 Others Mouse 小鼠 TIMP1 / TIMP / CLGI 人細胞裂解液 (陽性對照) |
RLFs, 大鼠肺成纖維細胞 | 人源NK原代細胞MMP-2/Gelatinase A(Human Matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
L1210(小鼠白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細胞裂解液 (陽性對照) | 恒河猴腎細胞;LLC-MK2 |
IL21 Protein Human 重組人 Ierleukin-21 / IL-21 蛋白 | 非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2 人癌細胞,，MCF-7細胞 SPC-A-1(肺腺癌細胞) |
EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-Survivin/RBITC 紅色熒光素羅丹明標記 Survivin 蛋白抗體(標記抗體)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OST-beta： 有機溶質(zhì)轉運蛋白OSTβ抗體 0.1ml | HCC1937(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0377LLC-WRC 256(大鼠腹水癌細胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴腎細胞;LLC-MK2 |
Sox9a： 轉錄因子sox9a抗體 0.2ml | Cdc25B： 細胞分裂周期蛋白25B抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml | ALOX15B Others Human 人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
人源NK原代細胞
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