人胰腺癌組織源星狀原代細胞公司出售的產(chǎn)品：人原代真皮成纖維細胞 肝癌細胞HBV病毒株 英文名稱： HEPG2.2.15 RM1 大鼠肌肉成纖維樣細胞 1ml/T75 人平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL LTK- 小鼠缺胸腺激酶L細胞 人原代子宮頸上皮細胞

人胰腺癌組織源星狀原代細胞

人胰腺癌組織源星狀細胞分離自患有胰腺癌病人的胰腺癌組織；胰腺癌是一種惡性程 度很高,，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤,，約90%為起源于腺管上皮的導(dǎo)管腺癌。其發(fā)病率和死亡率近年來明顯上升,。5年生存率<1%,，是預(yù)后差的惡性腫瘤之一。胰腺癌早期的確診率不高,，手術(shù)死亡率較高,，而很低,。胰腺癌 的病因尚不十分清楚,。其發(fā)生與吸煙、飲酒,、高脂肪和高蛋白飲食,、過量飲用咖啡,、環(huán)境污染及遺傳因素有關(guān)；近年來的調(diào)查報告發(fā)現(xiàn)糖尿病人群中胰腺癌的發(fā) 病率明顯高于普通人群,；也有人注意到慢性胰腺炎病人與胰腺癌的發(fā)病存在一定關(guān)系,，發(fā)現(xiàn)慢性胰腺炎病人發(fā)生胰腺癌的比例明顯增高；另外還有許多因素與此 病的發(fā)生有一定關(guān)系,，如職業(yè),、環(huán)境、地理等,。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進步，大部分癌癥的生存率都在提高,，例如乳腺癌，結(jié)直腸癌等腫瘤,，近幾十年來,，生存率得到 了大幅度的提升。但胰腺癌的生存率一直停滯不前,，缺乏有效的治療方法,，高的死亡率使其成為“癌中之",，近年來胰腺癌微環(huán)境的研究引起了諸多學(xué)者的重視,。胰腺癌微環(huán)境構(gòu)成復(fù)雜，其中,，胰腺星狀細胞是胰腺癌微環(huán)境中重要的間質(zhì)細胞之一，在胰腺癌細胞生長,、遷移,、侵襲,、血管生成,、免疫逃逸,、轉(zhuǎn)移及耐藥中發(fā)揮重要的作用,。因此針對胰腺星狀細胞和胰腺癌細胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的預(yù)后,。胰腺星狀細胞(pancreaticstellate cells , PSC)是一種胰腺特異性間質(zhì)細胞,，多在胰腺組織內(nèi)血管和導(dǎo)管周圍聚集，環(huán)繞在腺泡的基底部位,，正常靜比狀態(tài)下只占胰腺細胞的4%左右,，細胞質(zhì)中含有豐富的A脂滴，以表達膠質(zhì)纖絲酸性蛋白質(zhì)(glial filament acidic protein , GFAP ),、結(jié)合蛋白(Desmin)為特征,。在胰腺組織損傷、應(yīng)激等條件下PSC被激活,，成為一種肌成纖維細胞,，胞質(zhì)中富含A的脂滴消失,，以表達α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin , α-SMA)為標(biāo)志,，能大量合成細胞外基質(zhì)(extracellular matrix , ECM)和分泌多種細胞因子,。胰腺癌微環(huán)境中存在大量激活的PSC，在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用,。PSC通過誘導(dǎo)胰腺癌細胞(pancreatic cancercells , PCC)上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)變(epithelial-mesenchymaltransition , EMT)促進胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細胞脫離原發(fā)腫瘤灶到達靶器官的一個多步驟過程,，眾多研究表明EMT與胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EMT主要的特征是上皮細胞特征丟失同時伴間質(zhì)細胞特征獲得,，如E一鈣茹蛋白(E-cadherin)表達下降,，波形蛋白(Vimentin)表達上調(diào)。karnevi等研究發(fā)現(xiàn),，PSC與PCC共培養(yǎng)后能夠誘導(dǎo)PCC上皮性細胞標(biāo)志(E-cadherin , β-catenin)丟失,，促進間質(zhì)性細胞標(biāo)志(Vimentin,Snai-1）獲得，表明PSC在PCC的EMT形成過程中發(fā)揮了重要的作用,。PSC參與胰腺癌進展的各個環(huán)節(jié),，而PSC活化是PSC發(fā)揮功能的重要部分,。

產(chǎn)品名稱：人胰腺癌組織源星狀細胞

組織來源：胰腺癌

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：

培養(yǎng)基：含FBS、EGF,、Insulin,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

人胰腺癌組織源星狀細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀采用膠原酶消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

 

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。