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人羊膜間充質(zhì)干原代細胞
人羊膜間充質(zhì)干細胞分離自胎盤羊膜組織,；胎盤(placenta)是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官,，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成,。胎兒在子宮中發(fā)育,，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當?shù)莫毩⑿?。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內(nèi)分泌器官,。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,，以達到母子間物質(zhì)的交換,，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。羊膜是胎盤的內(nèi)層,，與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,，含有眼表上皮細胞，包括結(jié)膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質(zhì),，其光滑,，無血管、及淋巴,，具有一定的彈性,；在電鏡下，其分為五層：上皮層,、基底膜,、致密層、纖維母細胞層和海綿層,，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,，主要為Ⅰ,、Ⅲ、Ⅳ,、Ⅴ,、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份,。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質(zhì)細胞組成,，均具有多分化潛能，可轉(zhuǎn)化為元,，且還有合成,、釋放生物活性物質(zhì)和營養(yǎng)因子的功能。
英文名稱 | Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells | 組織來源 | 羊膜 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8051 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人羊膜間充質(zhì)干細胞
組織來源：羊膜
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
人羊膜間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的人羊膜間充質(zhì)干采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的人羊膜間充質(zhì)干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
小鼠周成纖維細胞MPNF | NHLRC1： 肌痙攣性癲癇病相關EPM2蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh MCM3 染色體維持缺陷蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TRP2/FITC 熒光素標記酪酶相關蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
STAT6(signal transducers and activators of transduction 6) 信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗原 0.5mg | Anti-RANK 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-GAD-67 /FITC 熒光素標記谷脫羧酶-67抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC27A1 長鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-PGC-1 Alpha/FITC 熒光素標記過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-ASPP1/FITC 熒光素標記p53凋亡刺激蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
ACVRL1 Others Canine 狗 ALK1 / ACVRL1 人細胞裂解液 (陽性對照) | FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人結(jié)直腸腺癌細胞;LS 174T [LS174T] | TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
hMNC-CB-c pooledula-pure 臍帶血來源的人類單核細胞 人前列腺微血管內(nèi)皮細胞HPrMEC | CSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
AHSG Others Human 人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 人細胞裂解液 (陽性對照) | IgG4 Others Human 人 IgG4-Fc (108 Ser/Pro) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
RSC, 大鼠雪旺細胞 | 人羊膜間充質(zhì)干原代細胞Anti-RANK 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
人骨骼肌成肌細胞(HSkMM)(5×105) | MM, 小鼠小膠質(zhì)細胞 |
平滑肌細胞生長添加物SMCGS | LXN Others Human 人 Latexin / LXN / TCI 人細胞裂解液 (陽性對照) |
ACHN細胞，人腎癌細胞系 小鼠B細胞雜交瘤細胞,W6/32細胞 CL-0438SF767(人腦瘤細胞)5×106cells/瓶×2 | GDPD3： 甘油0酸二酯酶0酸結(jié)構(gòu)域3抗體 0.2ml |
Human lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 人淋巴細胞功能相關抗原3Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | NRP2 Others Human 人 Neuropilin 2 / NRP2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2抗體 Anti-TTF-2 0.1ml | HCV-IgG(Human Hepatitis C virus IgG) ELISA Kit 人丙型肝炎IgG 96T |
phospho-APG4B(Ser309)： 0酸化自噬相關蛋白4B抗體 0.1ml | ACVRL1 Others Canine 狗 ALK1 / ACVRL1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
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