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詳細(xì)介紹
人心肌成纖維原代細(xì)胞
人心肌成纖維細(xì)胞分離自心臟組織；心臟由心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞組成,，非心肌細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的70%,，其中90%以上的非心肌細(xì)胞由心肌成纖維細(xì)胞組成。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),，在一定條件下,，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的心肌成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團(tuán),；細(xì)胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。近年來，人們逐漸了解到非心肌細(xì)胞不僅對(duì)心肌細(xì)胞具有結(jié)構(gòu)上的支持,、保護(hù)作用,，而且還具有自分泌和旁分泌功能，影響心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生理功能,；心肌成纖維細(xì)胞主要功能為對(duì)心肌細(xì)胞起結(jié)構(gòu)支持作用并負(fù)責(zé)細(xì)胞基質(zhì)外的合成,，當(dāng)心肌損傷時(shí)能產(chǎn)生旁分泌生長因子。心肌成纖維細(xì)胞是心臟結(jié)締組織中常見的細(xì)胞,，可合成和分泌膠原纖維,、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì),，并且在外傷等因素刺激下,，部分纖維細(xì)胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細(xì)胞，其功能活動(dòng)也得以恢復(fù),，參與組織損傷后的修復(fù),。因此，對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的生理學(xué)研究成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域研究的一個(gè)重點(diǎn)。
英文名稱 | Human Cardiac Fibroblast Cells | 組織來源 | 心臟組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7280 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人心肌成纖維細(xì)胞
組織來源：心臟組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人心肌成纖維采用膠原酶-聯(lián)合消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人心肌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
心肌成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | NMDAR2C： 谷酸受體2C抗體(N端) 0.1ml |
Rhesus antibody Rh MCM7 染色體維持缺陷蛋白7抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TRPM2 /FITC 熒光素標(biāo)記瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白抗體(M亞家族)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
SUMO 類泛素蛋白 0.5mg | Anti-OPCML 樣物質(zhì)結(jié)合蛋白/細(xì)胞粘附分子樣蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-GAD-65/FITC 熒光素標(biāo)記谷脫羧酶-65抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC27A5 脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-P-fscn1/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化纖維束蛋白同源物1/肌動(dòng)蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-phospho-ASK1(Thr845) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、小鼠0酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
CD86 Others Rat 大鼠 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Gibco 17100017 Collagenase Type I 1g |
人晶狀體上皮細(xì)胞裂解物HLEpiCL | ALDH3A1 Others Human 人 ALDH3A1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
HCM-c 人類心肌細(xì)胞 500,000cells 人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞HPASMC | IL18R1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18R1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
HDBEC-c 人類皮膚血內(nèi)皮細(xì)胞(HDBEC)來自少年者 500,000cells 肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | MBL2 Others Human 人 MBL2 / MBL / COLEC1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
SGC-7901, 人胃腺癌細(xì)胞系 | 人心肌成纖維原代細(xì)胞Anti-OPCML 樣物質(zhì)結(jié)合蛋白/細(xì)胞粘附分子樣蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
RK2 Others Rat 大鼠 kB / RK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | MiaPaCa-2, 人胰腺癌細(xì)胞 |
平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM-sf | AR42J(大鼠胰腺外分泌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R075大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞;WPMY-1 |
SNU-638人胃癌細(xì)胞 Human gasic cancer cells SNU-638 1640+10% FBS | GDF8： 生長分化因子8/肌肉抑制素抗體 0.2ml |
Human Anti-Thrombin III ,AT- III ELISA Kit 人抗Ⅲ抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | ERN1 Others Human 人 ERN1 / IRE1 (aa 465-977) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體 Anti-VEGFR2/VEGF-R2/Flk1 0.1ml | INS ELISA Kit 大鼠胰島素 96T |
ADORA1： 腺苷A1A受體抗體 0.2ml | CD86 Others Rat 大鼠 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
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