化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人小氣道上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人小氣道上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人小氣道上皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 小氣道組織 |
英文名稱 | Human Small Airway Epithelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7045 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人小氣道上皮細(xì)胞分離自小氣道；臨床上通常將內(nèi)徑小于2mm的小細(xì)支氣管稱為小氣道,。小氣道具有氣流阻力小,，但易阻塞的特點(diǎn)。在平靜吸氣時(shí),，空氣進(jìn)入狹窄的鼻咽部,，產(chǎn)生渦流。由于小氣道已無(wú)軟骨支持,，在脫離纖維鞘嵌入肺組織后,，管腔通暢性不象軟骨性氣道，易于受胸腔的壓力變化的影響,。小氣道上皮細(xì)胞形成連續(xù)呼吸道內(nèi)層,，作為隔絕外界有害物質(zhì)的物理和功能屏障發(fā)揮著的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處,，這些細(xì)胞在功能上能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),、產(chǎn)生化學(xué)因子進(jìn)行宿主防御、表達(dá)粘附分子,，并可能通過(guò)HLA-DR表達(dá)呈遞抗原,；它們還能產(chǎn)生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病,，如哮喘,、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化,，都涉及呼吸道表面上皮細(xì)胞的破壞,；小氣道上皮細(xì)胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴(kuò)增疾病和重塑提供新的治療選擇,。小氣道的生理功能特點(diǎn)：①小氣道阻力小,；②氣流速度慢,；③可調(diào)節(jié)控制通氣與血流比例。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
WI-38AV13細(xì)胞，人SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞 大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,，VSMC細(xì)胞 CL-0010786-O(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | Rhesus antibody Rh GFI1B 獨(dú)立生長(zhǎng)因子1B抗體 規(guī)格 0.2ml |
Human mammary carcinoma Marker-CA153 ELISA Kit 人癌標(biāo)志物-CA153Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/Bio 標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml |
IRS-4： 胰島素受體底物-4抗體 0.2ml | PCNA(Mouse proliferating cell nuclear antigen antibody)ELISA Kit 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RGS19 G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-LCAT/FITC 熒光素標(biāo)記卵0?；D(zhuǎn)移酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TAK1(Thr184) 0酸化轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β活化激酶1 規(guī)格 0.1ml | AIF(Mouse apoptosis inducing factor) ELISA Kit 小鼠凋亡誘導(dǎo)因子 96T |
SP2/0(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞;PG-4(S+L-) |
PC-3細(xì)胞，人胰腺癌細(xì)胞 人表皮癌細(xì)胞,A-431細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;BALB/C 3T3 | Hs 746T(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-1 | CAL-27(人舌鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-2H3 | 人細(xì)胞裂解物HNL |
HK-2細(xì)胞,，人腎小管近段上皮細(xì)胞 負(fù)鼠腎細(xì)胞,OK細(xì)胞 CL-0389NCI-H1688(人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人小氣道上皮原代細(xì)胞PCNA(Mouse proliferating cell nuclear antigen antibody)ELISA Kit 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體 96T |
人氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1036 人小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
GADD45A Others Human 人 GADD45A / DDIT-1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-H063人腎皮層上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
IFNB1 Protein Human 重組人 Ierferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) | Rhesus antibody Rh APLP2 淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml |
Protein BOC： 蛋白BOC抗體 0.2ml | 長(zhǎng)尾綠猴胚胎細(xì)胞;4179 |
Anti-TSARG4/FITC 熒光素標(biāo)記生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | prox1： prox-1抗體 0.1ml |
Anti-CD272/BTLA/FITC 熒光素標(biāo)記B和T淋巴細(xì)胞衰減蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | SP2/0(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
化工儀器網(wǎng)