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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌組織源成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌組織源成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人胃癌組織源成纖維原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 胃癌組織 |
英文名稱 | 見(jiàn)說(shuō)明 | 貨號(hào) | YS-01X7476 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人胃癌組織源成纖維細(xì)胞分離自胃癌組織,；胃癌（gastric carcinoma）是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤,，在我國(guó)各種惡性腫瘤中發(fā)病率居，胃癌發(fā)病有明顯的地域性差別,，在我國(guó)的西北與東部沿海地區(qū)胃癌發(fā)病率比南方地區(qū)明顯為高,。好發(fā)年齡在50歲以上，男女發(fā)病率之比為2:1,。由于飲食結(jié)構(gòu)的改變,、工作壓力增大以及幽門螺桿菌的感染等原因，使得胃癌呈現(xiàn)年輕化傾向,。胃癌可發(fā)生于胃的任何部位,，其中半數(shù)以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎,、胃小彎及前后壁均可受累,。絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌，早期無(wú)明顯癥狀,，或出現(xiàn)上腹不適,、噯氣等非特異性癥狀，常與胃炎、胃潰瘍等胃慢性疾病癥狀相似,，易被忽略,，因此，目前我國(guó)胃癌的早期診斷率仍較低,。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開(kāi)始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長(zhǎng),，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng),，平坦,、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
Hepa 1-6細(xì)胞,，肝癌細(xì)胞 人結(jié)直腸癌細(xì)胞,HCT116細(xì)胞 CM-H012人支氣管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | Binding Inhibitor： 乙酰A結(jié)合蛋白抗體 0.2ml |
Anti-HOXc8 HOXc8抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ABCA2 三0酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Cathepsin B/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗組織蛋白酶B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ID3 DNA結(jié)合抑制因子3抗體 規(guī)格 0.2ml |
IRS-2 胰島素受體底物-2(抗原) 0.5mg | HCMV UL49： 人巨細(xì)胞病毒UL49蛋白抗體 0.1ml |
IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM120B 組織激活過(guò)氧化酶活化增生受體γ蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
大鼠肝細(xì)胞瘤;H4-II-E-C3 | KMB17 人胚肺成纖維細(xì)胞 |
CM-H083人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | Hepa 1-6, 小鼠肝癌細(xì)胞 |
CM-H024人胰腺星狀細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 細(xì)胞名稱 種屬 |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(傣族);KM9405 | 家兔皮膚細(xì)胞;DR-S1 |
615小鼠癌瘤株;Ca759 小鼠卵巢上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人胃癌組織源成纖維原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh ID3 DNA結(jié)合抑制因子3抗體 規(guī)格 0.2ml |
COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞 | 大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞(RM)(5×105) |
大鼠腎系膜細(xì)胞;RMC 骨肉瘤細(xì)胞，U-2 OS細(xì)胞 Walker-256細(xì)胞,，大鼠肝癌細(xì)胞(癌細(xì)胞接種到肝臟成瘤) | 人真皮淋巴內(nèi)皮細(xì)胞HDLEC |
LDH細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒LDH | Rhesus antibody Rh sIgA/FITC FITC標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格 100ug |
GR(Mouse glucocorticoid receptor) ELISA Kit 小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體 96T | HUM, 正常人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 Human |
PACAP/VIP receptor 腺苷酸環(huán)化酶激活肽/血管活性腸肽受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | Big ET(Human Big Endothelin) ELISA Kit 人大內(nèi)皮素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MT-ND5： NADH復(fù)合體5抗體 0.2ml | 大鼠肝細(xì)胞瘤;H4-II-E-C3 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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