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本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的人外周血未成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞,、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的人外周血樹突狀細胞經(jīng)CD86免疫熒光鑒定,、 細 胞形態(tài)等綜合鑒定，純度可達80%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人外周血樹突狀原代細胞(未成熟DC細胞) | 組織來源 | 外周血 |
英文名稱 | Human Peripheral Blood Immature Dendritic Cells | 貨號 | YS-01X8307 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人外周血DC細胞分離自外周血,，由外周血單核細胞誘導而成的；外周血是除骨髓之外的血液,，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念,。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未 成熟樹突狀細胞，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,，在GM- CSF,、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細胞大而形態(tài)不規(guī)則,，表面皺褶多,，亦可見少量短刺狀突，胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強的遷移能力,，伴隨有部分未誘導成的單核細胞,，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα,、LPS等誘導而成,，多數(shù)呈懸浮生長， 細胞呈圓形,，細胞體積進一步增大,，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞,。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟,。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志，主要通過形態(tài)學,、組合性細胞表面標志,、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80,、CD86等共刺激分子,，進而激活T淋巴細胞，誘導免疫應答,，處于啟動,、調(diào)控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié),；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應 答,，不能激活T細胞的第二信號,，可導致T細胞無能，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹突狀細胞表面CD80,、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,，一般在30%以下,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細胞形態(tài)：圓形、梭形,、多角形,，形態(tài)多樣
傳代特性：屬于高度分化細胞,；屬于不增殖細胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
人外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
95-D細胞，高轉(zhuǎn)移肺癌細胞 人喉癌細胞,M2e細胞 正常大鼠腎細胞;NRK | Rhesus antibody Rh GFP 綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體) 規(guī)格 0.1ml |
Human Pancreatic carcinoma markers-CA242 ELISA Kit 人胰腺癌標志物CA242Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml |
IASPP： 細胞凋亡ASPP家族的另一個成員抗體 0.1ml | LSP(Human liver specific lipoprotein) ELISA Kit 人抗肝特異性脂蛋白抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RGS4 精神分裂癥相關(guān)蛋白9抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Phospho-LATS1 (Ser909) /FITC 熒光素標記0酸化抑制基因LATS1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TAK1(Thr187) 0酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1 規(guī)格 0.1ml | SDF-1a/CXCL12(Human Stromal cell derived factor 1a) ELISA Kit 人基質(zhì)細胞衍生因子1a 96T |
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2 | BRL-3A 大鼠正常肝細胞 |
CL-0118HT-29(人結(jié)腸癌細胞)5×106cells/瓶×2 | 人絨毛間充質(zhì)成纖維細胞 |
CM-H040人結(jié)腸粘膜上皮細胞培養(yǎng)基100mL | RLFs, 大鼠肺成纖維細胞 Rattus |
大鼠小腸隱窩上皮細胞;IEC-6 | 小鼠直腸平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL |
正常小鼠Leydig細胞;TM3 小鼠子宮頸上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | 人外周血樹突狀原代細胞(未成熟DC細胞)LSP(Human liver specific lipoprotein) ELISA Kit 人抗肝特異性脂蛋白抗體 96T |
人小細胞肺癌細胞;NCI-H446 | VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人細胞裂解液 (陽性對照) |
IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H060人支持細胞培養(yǎng)基100mL |
雜交瘤(B類);C3110D2E11 | Rhesus antibody Rh APNG/MPG N-甲基嘌呤DNA糖基化酶 規(guī)格 0.2ml |
BNP： 腦素/利肽抗體 0.1ml | 豹貓肺成纖維樣細胞;LCL2 |
Anti-Rad17/FITC 熒光素標記細胞周期檢控Rad17蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PKR： 蛋白激酶R抗體 0.1ml |
Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC 熒光素標記CD244抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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