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詳細(xì)介紹
人外周血單核原代細(xì)胞
人外周血單核細(xì)胞分離自外周血,；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱(chēng)為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類(lèi)開(kāi)始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念,。單核細(xì)胞起源于骨髓中的造血干細(xì)胞,，并在骨髓中發(fā)育。當(dāng)它們從骨髓進(jìn)入血液時(shí)仍然是尚未成熟的細(xì)胞,。與其他血細(xì)胞比較，單核細(xì)胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶,，并且具有更強(qiáng)的吞噬作用,。單核細(xì)胞在血液中停留2-3天后遷移到周?chē)M織中，細(xì)胞體積繼續(xù)增大,，直徑可達(dá)50-80μm,，細(xì)胞內(nèi)所含的溶酶體顆粒和線粒體的數(shù)目也增多，成為成熟的細(xì)胞,。固定在組織中的單核細(xì)胞稱(chēng)為組織巨噬細(xì)胞,，它們經(jīng)常大量存在于淋巴結(jié)、肺泡壁,、骨髓,、肝和脾等器官。激活了的單核細(xì)胞和組織巨噬細(xì)胞能生成并釋放多種細(xì)胞毒,、干擾素和白細(xì)胞介素,，參與機(jī)體防衛(wèi)機(jī)制，還產(chǎn)生一些能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的因子,。在炎癥周?chē)鷨魏思?xì)胞能進(jìn)行細(xì)胞分裂，并包圍異物,。
英文名稱(chēng) | Human Peripheral Blood Monocyte Cells | 組織來(lái)源 | 外周血 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7551 |
細(xì)胞形態(tài) | 圓形,、巨噬細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱(chēng)：人外周血單核細(xì)胞
組織來(lái)源：外周血
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài) 圓形,、巨噬細(xì)胞樣
傳代特性 不增殖；不傳代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血單核采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血單核經(jīng)CD14免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
T-CEM細(xì)胞,，人T細(xì)胞白血病細(xì)胞 615小鼠肺癌瘤株,HP615細(xì)胞 MesenFectagen? 間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 | Rhesus antibody Rh GFP 綠色熒光蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
HSCCAg-2(uman Squamous Cell Carcinoma Antigen 2) ELISA Kit 人鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml |
ICAD： Caspase激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑抗體 0.1ml | EMAb(Human eye muscle antibody) ELISA Kit 人抗眼肌抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RGS5 G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子5抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Phospho-LATS1 (Thr1079) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化抑制基因LATS1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Talin (Ser425) 0酸化踝蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | MBP ELISA Kit 大鼠主要堿性蛋白 96T |
NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | CM-R026大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
MKN-45細(xì)胞,，人低分化胃癌細(xì)胞 人母細(xì)胞瘤細(xì)胞,BE(2)C細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2 | CRFK(貓腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
II型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL | IL3 Protein Rat 重組大鼠 IL3 / ierleukin 3 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
腎上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人腦血管平滑肌細(xì)胞裂解物HBVSMCL |
TE-1人食管癌細(xì)胞 Human esophageal cancer cell line TE-1. RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | 人外周血單核原代細(xì)胞EMAb(Human eye muscle antibody) ELISA Kit 人抗眼肌抗體 96T |
CL-0043C127(小鼠癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | PECAM1 Others Human 人 CD31 / PECAM1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
PRKD3 Others Human 人 PKC nu / PRKD3 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-H057人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞;DCS | Rhesus antibody Rh APOA1 載脂蛋白A1抗體 規(guī)格 0.1ml |
Bcl-2 beta： Bcl2 beta蛋白抗體 0.2ml | 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子細(xì)胞;U14-GFP |
Anti-CD14/Biotin 化CD14抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Pancreatic Lipase： 胰脂肪酶抗體 0.1ml |
Anti-CD229/SLAMF3/FITC 熒光素標(biāo)記CD229抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi),；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
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