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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人退行性椎間盤(pán)髓核采用膠原酶-蛋白酶混合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人退行性椎間盤(pán)髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人退行性椎間盤(pán)髓核原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 椎間盤(pán)組織 |
英文名稱 | 見(jiàn)說(shuō)明 | 貨號(hào) | YS-01X7518 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人退行性椎間盤(pán)髓核細(xì)胞分離退行性椎間盤(pán)組織；椎間盤(pán)是位于脊柱兩椎體之間,，分為中央部的髓核,，富于彈性的膠狀物質(zhì)；周?chē)康睦w維環(huán),，由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列,。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上,，下面骺環(huán)中間的骨面,。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來(lái)。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成,，位于髓核的四周,。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷,。髓核,，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性,，為椎間盤(pán)結(jié)構(gòu)的一部分,，位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細(xì)胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì),。嬰幼兒時(shí)期的髓核含水量為80%-90%,，即使到了老年，其含水量也在70%上下,。髓核在出生時(shí)體積大而松散,，位于椎間盤(pán)的中央，至成年時(shí)位置移至椎間盤(pán)的中后部,；在成年以前構(gòu)成髓核的主要物質(zhì)是大量蛋白多糖復(fù)合體,、膠原纖維和纖維軟骨，隨著年齡的增長(zhǎng),，髓核中的蛋白多糖解聚增多,，水分逐漸減少，膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基AM | NALP12： NALP12抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh MCP-2/CCL8 單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體(小鼠) 規(guī)格 0.1ml | Anti-Trk B/FITC 熒光素標(biāo)記酪激酶B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TBX2/T-box2(T-box Protein 2) 新型抑癌基因(多肽) 0.5mg | Anti-OGG1/8 hydroxyguanine DNA glycosylase 8-羥基DNA糖基化酶Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-phospho-GAB2(Ser623) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化接頭蛋白Gab2抗體體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC30A3/ZNT3 溶質(zhì)載體鋅轉(zhuǎn)運(yùn)3抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-PERK/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-ASCL1/MASH1 /FITC 熒光素標(biāo)記母細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)移因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
APCDD1 Others Human 人 APCDD1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | V79(倉(cāng)鼠肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC |
人淋巴成纖維細(xì)胞裂解物HLFL | EDNRB Others Human 人 EDNRB / Endothelin B Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | EPHA7 Others Human 人 EphA7 / EHK3 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
Ishikawa(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 滑膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | FCGR2A Others Human 人 CD32a / FCGR2A (167 His) CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7 | 人退行性椎間盤(pán)髓核原代細(xì)胞Anti-OGG1/8 hydroxyguanine DNA glycosylase 8-羥基DNA糖基化酶Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
SMR3B Others Human 人 SMR3B 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 人胚肺二倍體細(xì)胞;HL |
皮膚肥大細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R083大鼠滑膜細(xì)胞培養(yǎng)基100mL EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(傣族);KM9405 |
SK-HEL-1細(xì)胞,，皮膚黑色素瘤細(xì)胞 人子宮鱗癌細(xì)胞(高分化),HCC 94細(xì)胞 人支氣管上皮細(xì)胞總RNAHBEpiC NA | GDNF： 膠質(zhì)細(xì)胞源性營(yíng)養(yǎng)因子抗體 0.1ml |
Human thrombin receptor,TR ELISA Kit 人受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 大鼠間骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(RMSC-bm)(5×105) |
壞死因子-α抗體 Anti-TNF-α 0.1ml | dDAVP(Human /1-desamino-8-D-arginine vasopressin) ELISA Kit 人去加壓素/1-去基-8-右旋-精酸加壓素 96T |
ADAM17： 壞死因子α轉(zhuǎn)換酶 0.1ml | APCDD1 Others Human 人 APCDD1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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