人腎小球內(nèi)皮原代細胞公司出售的產(chǎn)品：人原代腦成纖維細胞 人結(jié)腸癌細胞 英文名稱： LOVO K7M2wt[K7M2-WT] 小鼠骨肉瘤成骨細胞 1ml/T75 lovo, 人結(jié)腸癌細胞 HSF 人皮膚成纖維樣細胞 小鼠原代脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細胞

人腎小球內(nèi)皮原代細胞

人腎小球內(nèi)皮細胞分離自腎組織,；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液,，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物,、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),，如葡萄糖,、蛋白質(zhì)、氨基酸,、鈉離子,、鉀離子、等,，以調(diào)節(jié)水,、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡,。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素,、促紅細胞生成素,、活性D3、前列腺素,、激肽等,，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,，使新陳代謝得以正常進行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢,，被鮑氏囊所包裹,，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球,。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管,，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈,。在腎小球內(nèi),，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行,。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi),。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球內(nèi)皮細胞是一類特殊微血管類型的細胞,。細胞為圓形,、多角形，單層貼壁生長,；細胞質(zhì)豐富,，細胞核為圓形或卵圓形。腎小球內(nèi)皮細胞被覆于腎小球毛細血管壁腔側(cè),，與血流直接接觸,，是腎小球濾過膜的第一道屏障，可粘附細菌和白細胞,，修復(fù)基底膜,，并有抗凝、抗血栓的作用,；所以,，體外培養(yǎng)的腎小球內(nèi)皮細胞在免疫學(xué)和病理生理學(xué)領(lǐng)域中具有重要的研究價值,。

產(chǎn)品名稱：人腎小球內(nèi)皮細胞

組織來源：腎組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的人腎小球內(nèi)皮采用先機械研磨過不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小球,、后用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人腎小球內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。