化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人腎成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人腎成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人腎成纖維原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腎組織 |
英文名稱 | Human Renal Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X7265 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
人腎成纖維細(xì)胞分離自腎組織,；腎臟是機體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物,、毒物,，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖,、蛋白質(zhì),、氨基酸、鈉離子,、鉀離子,、等，以調(diào)節(jié)水,、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡,。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素,、促紅細(xì)胞生成素,、活性D3、前列腺素,、激肽等,，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,，使新陳代謝得以正常進行。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用,。腎成纖維細(xì)胞是腎臟結(jié)締組織中重要的細(xì)胞類型,，在體外培養(yǎng)中，一般大致成梭形,、多角形或不規(guī)則形等,，為貼壁生長型細(xì)胞。剛分離的腎成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團；細(xì)胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡,。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。其主要功能有：①組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分,；②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子；③受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞,，進而影響腎臟病變,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
雪旺氏細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | FE ELISA Kit 大鼠鐵蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1orf131： 1號染色體開放閱讀框131抗體 0.2ml | phospho-GSK-3 Beta(Ser9)： 0酸化糖原合酶激酶-3β抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh CENPA 著絲粒蛋白A 規(guī)格 0.1ml | PCDH1： 原鈣粘附蛋白1抗體 0.2ml |
Anti-NuMA/FITC 熒光素標(biāo)記核有絲分裂器NuMA蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | GADD153(Growth arrest and DNA damage-inducible 153) 生長抑制DNA損傷基因153抗原 0.5mg |
Goat Anti-human IgG/Gold 金標(biāo)記羊抗人IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml | MSH2： 錯配修復(fù)蛋白2抗體 0.1ml |
ICAM1 Others Rat 大鼠 ICAM1 / CD54 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | FZD1 Others Mouse 小鼠 FZD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞HCPF | FES Others Human 人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HWP visceral Pellet 人類內(nèi)臟白前脂肪細(xì)胞團塊 > 1 mio.cells 人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHDMEC NA | F7 Others Mouse 小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
GFRA1 Others Mouse 小鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 牛陀螺狀細(xì)胞;BT 雞淋巴瘤細(xì)胞，DT40細(xì)胞 Kert-3細(xì)胞,，小鼠腎癌細(xì)胞 |
T-109B彈(含100mL酶解緩沖液)10mL | 人腎成纖維原代細(xì)胞PCDH1： 原鈣粘附蛋白1抗體 0.2ml |
雜交瘤(B類);Z172A4C4C6F3G12 Butt's 淋巴瘤細(xì)胞,，Raji細(xì)胞 HBZY-1細(xì)胞，大鼠腎小球系膜細(xì)胞EC(HBZY-1) | 人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝臟RNAHMSC-hp miRNA5 μg |
人卵巢畸胎瘤細(xì)胞;PA-1 | PDHA1 Others Human 人 PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
IL13RA1 Others Mouse 小鼠 IL-13Ra1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Anti-IL-8/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、,、豬、羊,、兔白介素8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-RPLP0 酸性核糖體0蛋白大亞基P0抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Hce-8693細(xì)胞,，人盲腸腺癌細(xì)胞(未分化) 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤,Rb細(xì)胞 人Burkkit淋巴瘤細(xì)胞;Daudi |
Rhesus antibody Rh phospho-FRS2(Tyr436) 0酸化成纖維細(xì)胞生長因子受體底物2抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHDC5 kelch樣蛋白5抗體 規(guī)格 0.2ml |
NF-KapB p65 (Rabbit nuclear factor-KapB p65) ELISA Kit 兔核因子κB亞基p65親和肽 96T | ICAM1 Others Rat 大鼠 ICAM1 / CD54 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
化工儀器網(wǎng)