人神經(jīng)少突膠質(zhì)原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代角膜基質(zhì)細(xì)胞 食管鱗癌 英文名稱： KYSE150 FDC-P1 小鼠骨髓細(xì)胞 1ml/T75 Ca Ski, 人細(xì)胞 MRC-5 人胚肺細(xì)胞 小鼠原代浦肯野細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人少突膠質(zhì)采用消化,、混合細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過(guò)專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人少突膠質(zhì)經(jīng)GC（Galactocerebroside）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人少突膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦皮層組織,；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分,，它是元胞體集中的地方,。內(nèi)部則是由纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面,，即外側(cè)面（約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3）,、內(nèi)側(cè)面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂,，溝或裂之間的隆起叫回,，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝,、裂有大腦外側(cè)裂,、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔,，使大腦皮質(zhì)組分為額葉,、頂葉、顳葉,、枕葉四大部分,。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞系統(tǒng)，在銀浸染標(biāo)本中,，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小,，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞,。但是用特異性免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示的少突膠質(zhì)細(xì)胞,，其突起并不少，而且還有許多分支,。少突膠質(zhì)細(xì)胞的主要功能是在中樞系統(tǒng)中包繞軸突,、形成絕緣的髓鞘結(jié)構(gòu),、協(xié)助生物電信號(hào)的跳躍式高效傳遞并維持和保護(hù)元的正常功能,。其異常不僅會(huì)導(dǎo)致中樞系統(tǒng)脫髓鞘病變，還會(huì)引起元損傷或精神類(lèi)疾病,，甚至可以引發(fā)腦腫瘤,。根據(jù)少突膠質(zhì)細(xì)胞的分布和位置可分為三種：①束間少突膠質(zhì)細(xì)胞（interfasicular-oligodendrocyte），分布在中樞系統(tǒng)的白質(zhì)的纖維束之間,；②細(xì)胞周少突膠質(zhì)細(xì)胞（perineuronal-oligodendrocyte）,，分布在中樞系統(tǒng)的灰質(zhì)區(qū)，常位于細(xì)胞周?chē)?，與細(xì)胞的關(guān)系密切,，故又稱為細(xì)胞周衛(wèi)星細(xì)胞（perineuronal-satellite-cell），但在細(xì)胞胞體與此類(lèi)細(xì)胞之間亦常有星形膠質(zhì)細(xì)胞的薄片狀突起分隔,；③血管周少突膠質(zhì)細(xì)胞（pcrivascular-oligodendrocyte）,，主要分布在中樞系統(tǒng)內(nèi)的血管周?chē)Ｉ偻荒z質(zhì)細(xì)胞形成的髓鞘膜是為特化和復(fù)雜動(dòng)物細(xì)胞膜之一,，其上有眾多跨膜蛋白和表面蛋白用以維持髓鞘的致密穩(wěn)定結(jié)構(gòu),。如半乳糖腦苷脂（GC），它是髓鞘的一種主要類(lèi)脂,，用GC抗體鑒別成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞是一種比較早的免疫鑒定方法,。近十年來(lái)，發(fā)育學(xué)科進(jìn)展較快,，更多的少突膠質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)記物被鑒定出來(lái),，如PDGFRa、Mbp,、CNP,、SOX-10。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement,、PDGF-AA,、bFGF、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

操作步驟：

1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

8. 將爬片周?chē)疂n吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：