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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人氣管平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 氣管 |
英文名稱 | Human Tracheal Smooth Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X7063 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人氣管平滑肌細(xì)胞分離自氣管組織,；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分,；為后壁略平的圓筒型管狀,。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連,；向下至第四,、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左,、右主支氣管,，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成,，有彈性,，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后,，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來(lái),，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開(kāi)狀態(tài),。管腔襯以粘膜,，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒,，纖毛不斷向咽部擺動(dòng)將粘液與灰塵排出,，以凈化吸入的氣體。氣管平滑肌是氣管的重要結(jié)構(gòu)組成之一,，在機(jī)體的正常生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,；能夠保持氣道張力，維持氣道管狀形態(tài),，從而有利于氣體流通,，保持肺部通氣。氣管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。氣管平滑肌細(xì)胞的異常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生,、肥大是氣道重塑的關(guān)鍵,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
胰島素鐵硒傳遞蛋白 100xITS | Anti-TSARG7 發(fā)生相關(guān)的新基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Human Elastase ELISA Kit 人彈 96T | Anti-Phospho-MYPT1 (Ser507)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化肌球蛋酸酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TIMP-4 金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體 規(guī)格 0.1ml | MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶5Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HOXA9： 同源盒蛋白HOXA9抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh CCDC102B 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白102B抗體 規(guī)格 0.2ml |
Fas Ligand： FasL抗體 0.1ml | MIF ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | A875(人黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1 |
人慢性髓系白血病細(xì)胞;K562 | CSF1R Others Mouse 小鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
FCAR Others Human 人 FCAR / CD89 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
ADIPOQ Others Mouse 小鼠 ADIPOQ / ACDC / Adiponectin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | HTEpC Pellet 人類氣管上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人骨骼肌細(xì)胞cDNAHSkMC cDNA |
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);F9-CAG-tTA-3A1 | 人氣管平滑肌原代細(xì)胞MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶5Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HIMEC)( 5×105 ) RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞 Rattus | 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1 |
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO | HL-60/Ad細(xì)胞,，人白血病阿耐藥株 小鼠單核巨噬細(xì)胞,J774A.1細(xì)胞 尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基UCM |
TEK Others Cynomolgus 食蟹猴 Tie2 / TEK 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Anti-PSCA /FITC 熒光素標(biāo)記抗前列腺干細(xì)胞抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Oncomodulin： 癌調(diào)蛋白/癌鈣蛋白抗體 0.2ml | U-2 OS(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T6-Swiss albino |
Sphingomyelin Synthase 2： 鞘0脂合成酶2抗體 0.2ml | CASC5： 易感性候選基因5抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格 0.1ml | ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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