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本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人臍靜脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人臍靜脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人臍靜脈內(nèi)皮原代細胞 | 組織來源 | 臍帶組織 |
英文名稱 | Human Umbilical Vein Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7292 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人臍靜脈內(nèi)皮細胞分離自臍帶組織,；它是臍靜脈的重要結(jié)構(gòu)組成細胞之一，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用,。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu),，臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈,。在子宮中,，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運送至胎盤,，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒,。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
胰腺癌組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml | Hyp ELISA Kit 大鼠羥Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
alpha COP I： COPA蛋白抗體 0.2ml | GNAI3： 抑制型G蛋白α3抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CENPO 著絲粒蛋白O抗體 規(guī)格 0.2ml | PCDHA5： 原鈣粘附蛋白α5抗體 0.2ml |
Anti-Nitric oxide/NO/FITC 熒光素標記抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | GATA-3(GATA binding factor 3) GATA結(jié)合蛋白3抗原 0.5mg |
Goat Anti-human serum albumin/Gold 金標記羊抗人白蛋白(10/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml | Music Acetylcholine receptor M3： 毒蕈堿型乙酰受體M3抗體 0.1ml |
CD2 Others Canine 狗 CD2 人細胞裂解液 (陽性對照) | IL13RA2 Others Mouse 小鼠 IL13RA2 / CD213A2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人毛細胞HHDPC | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) HA 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人前列腺平滑肌細胞(HPSMC)(5×105) 細胞名稱 種屬 | 人細胞(HN) (10×106 ) |
HUVEC-c Growth Medium 2 pooled 500,000cells 肺大靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 牛胚氣管細胞;EB (NBL-4) 人臍靜脈內(nèi)皮細胞株,，ECV304細胞 TC-1細胞,，HPVl6 E6、E7和ras基因共轉(zhuǎn)化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮細胞 |
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-3E5 | 人臍靜脈內(nèi)皮原代細胞PCDHA5： 原鈣粘附蛋白α5抗體 0.2ml |
H293T細胞,，人類胚胎腎臟表皮細胞 貓腎細胞,CRFK細胞 CL-0267CNE-2Z(人鼻咽癌細胞)5×106cells/瓶×2 | 人脊髓星形膠質(zhì)細胞裂解物HA-sp L |
腎實質(zhì)細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | TLK2 Others Human 人 TLK2 / PKU-ALPHA (aa 397-772) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
HBEpC-c 人支氣管上皮細胞(HBEpC) 500,000cells 主動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | Anti-gp130/IL-6R /FITC 熒光素標記白介素-6受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-RNF126 環(huán)指蛋白126抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-3E5 蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL |
Rhesus antibody Rh phospho-NFATc2(Ser330) 0酸化核因子活化T細胞胞漿蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHL11 Kelch樣蛋白11抗體 規(guī)格 0.2ml |
HBsAb 乙型肝炎表面抗體 96T | CD2 Others Canine 狗 CD2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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