化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
?方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人臍動(dòng)脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人臍動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人臍動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來源 | 臍帶組織 |
英文名稱 | Human Umbilical Artery Smooth Muscle Cells | 貨號 | YS-01X7299 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自臍帶組織；它是臍動(dòng)脈的重要結(jié)構(gòu)組成細(xì)胞之一,，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用,。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)，臍帶中通過尿膜的血管即臍動(dòng)脈和臍靜脈,，卵黃囊的血管即臍腸系膜動(dòng)脈及臍腸系膜靜脈,。在子宮中，子宮動(dòng)脈在胎盤的母體部分出的毛細(xì)血管,，與胎盤的子體部胎兒毛細(xì)血管靠近,，在此處母體和胎兒的血液間進(jìn)行CO2和O2,，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動(dòng)脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運(yùn)送至胎盤,，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運(yùn)送給胎兒,。由于臍帶是分娩過程中的廢棄物，同時(shí)從臍帶中分離臍靜動(dòng)平滑肌細(xì)胞方法相對成熟,，使得體外培養(yǎng)的臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞作為研究血管的模型細(xì)胞,。臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品：
MRC-5細(xì)胞,，人胚肺細(xì)胞 大鼠肺上皮Ⅱ型細(xì)胞,RLE-6TN細(xì)胞 T-109B彈(含100mL酶解緩沖液)10mL | ASB12： 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族12抗體 0.2ml |
Anti-HLA G 人類白細(xì)胞抗原G抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ABCG2/CD338 三0酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser45)/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大、小鼠0酸化β 連環(huán)素蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFI16 γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16抗體 規(guī)格 0.1ml |
MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原) 0.5mg | HCV-NS3： 丙型肝炎病毒-NS3抗體 0.1ml |
IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM151A FAM151A蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
SK-OV-3(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 大耳山羊腎細(xì)胞;LDG-2 |
SK-N-MC細(xì)胞,，上皮瘤細(xì)胞 鼠骨髓瘤細(xì)胞,P3/NS1/1-Ag4-1細(xì)胞 人胃腺癌細(xì)胞;SGC-7901 [SGC7901] | 小鼠Lewis肺癌瘤株;LLT |
BxPC-3 人原位胰腺腺癌細(xì)胞 | NOG Protein Human 重組人 Noggin / NOG 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞;PC-12 [PC12] | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(傣族);KM9405 |
293XL-hTLR7人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line 293XL-hTLR7 DMEM+10% Hyclone 滅活血清+10 μg/ml Blasticidin | 人臍動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh IFI16 γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16抗體 規(guī)格 0.1ml |
16HBE(人支氣管上皮樣細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | CD55 Others Rat 大鼠 CD55 / DAF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
3T6swiss細(xì)胞,，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 人癌細(xì)胞,M453細(xì)胞 過氧化物酶分析試劑盒GPX | 人腦膜細(xì)胞HMC |
I 型膠原細(xì)胞檢測試劑盒Col | Rhesus antibody Rh IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml |
SP ELISA Kit 大鼠P物質(zhì) 96T | THP-1人單核白血病細(xì)胞 Human |
FasL(抗原) Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | PGE2(Human Prostaglandin E2) ELISA Kit 人前列腺素E2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
phospho-MARK4(Ser423)： 0酸化絲酸/蘇酸蛋白激酶MARK4抗體 0.1ml | SK-OV-3(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
化工儀器網(wǎng)