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詳細(xì)介紹
人臍帶血造血干原代細(xì)胞
人臍帶血造血干細(xì)胞分離自臍帶血,；臍帶血是胎兒娩出,、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液,。近十幾年的研究發(fā)現(xiàn),，臍帶血中含有可以重建造血和免疫系統(tǒng)的造血干細(xì)胞,，可用于造血干細(xì)胞移植,，因此，臍帶血已成為造血干細(xì)胞的重要來源,。臍帶血中含有大量的干細(xì)胞,，干細(xì)胞是生命的種子，它會(huì)分化成機(jī)體的各種細(xì)胞,，結(jié)出各種不同的果實(shí)——血液細(xì)胞,、細(xì)胞、骨骼細(xì)胞等,。干細(xì)胞是具有自我更新,、高度增殖和多項(xiàng)分化潛能的細(xì)胞群體；這些細(xì)胞可以通過分裂維持自身細(xì)胞的特性和數(shù)量，又可進(jìn)一步分化為各種組織細(xì)胞,，從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用,。造血干細(xì)胞具有自我更新能力并能分化為各種血細(xì)胞的前提細(xì)胞，終生成各種血細(xì)胞成分,，包括紅細(xì)胞,，白細(xì)胞和血小板。造血干細(xì)胞需要根據(jù)機(jī)體的生理需求適時(shí)的補(bǔ)充血液系統(tǒng)各個(gè)成熟細(xì)胞組分,。同時(shí)在損傷,、炎癥等應(yīng)激狀態(tài)下，造血干細(xì)胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個(gè)細(xì)胞組分的生理平衡的角色,。臨床治療中,，造血干細(xì)胞移植廣泛應(yīng)用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病，在其它實(shí)體瘤的治療中,，比如淋巴瘤,，生殖細(xì)胞瘤，乳腺癌,，小細(xì)胞肺癌,，主要應(yīng)用于常規(guī)治療失敗或復(fù)發(fā)難治以及具有不良預(yù)后因素的患者。造血干細(xì)胞以不對稱有絲分裂方式進(jìn)行增殖,，一個(gè)干細(xì)胞分裂產(chǎn)生兩個(gè)子細(xì)胞,，一個(gè)分化為造血祖細(xì)胞，另一個(gè)則保持干細(xì)胞特征,。造血干細(xì)胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細(xì)胞同時(shí),，保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適,，造血干細(xì)胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右,。 造血干細(xì)胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)（滋養(yǎng)層細(xì)胞），缺少滋養(yǎng)層細(xì)胞不增殖,，無法長期培養(yǎng),，本產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細(xì)胞灌裝發(fā)貨，不包含滋養(yǎng)層,，因此收貨后建議盡快實(shí)驗(yàn),。
英文名稱 | Human Umbilical Cord Blood Hematopoietic Stem Cells | 組織來源 | 臍帶血 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8301 |
細(xì)胞形態(tài) | 圓形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人臍帶血造血干細(xì)胞
組織來源：臍帶血
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、SCF,、IL-3,、TPO、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形
傳代特性：不建議傳代
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
人臍帶血造血干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的人臍帶血造血干采用采集臍帶血,、密度梯度離心,、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的人臍帶血造血干經(jīng)CD34免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
恒河猴肺細(xì)胞;RM-L1 | TSGF(Mouse Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor) ELISA KIT 小鼠特異生長因子/相關(guān)因子 96T |
RNF93： 環(huán)指蛋白93抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Rab3A+Rab3B+Rab3C+Rab3D ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HCV-Core/FITC 熒光素標(biāo)記丙型肝炎病毒-C區(qū)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C20orf43： 20號染色體開放閱讀框43抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh BRN3B/POU4F2 腦特定蛋白Brn3B抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CT DNA /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗小胸腺DNA 抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
酪蛋白激酶受體B2抗體 Anti-EphB2 R 0.1ml | ANKK1： 錨定蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白激酶ANKK1抗體 0.2ml |
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細(xì)胞 | KYSE450 人食管癌細(xì)胞 |
CL-0328CEM/C1(人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | rEPC,，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 |
膀胱上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | VERO細(xì)胞衍生株;SVP |
MRC-5 人胚肺成纖維細(xì)胞 | CL-0064CoC1(人卵巢癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
Saos-2細(xì)胞,，骨肉瘤細(xì)胞 人細(xì)胞,Hela P10s-11F細(xì)胞 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHBMEC NA | 人臍帶血造血干原代細(xì)胞C20orf43： 20號染色體開放閱讀框43抗體 0.1ml |
大隱靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | NRK細(xì)胞，大鼠腎小管上皮細(xì)胞 PT-67(病毒轉(zhuǎn)染小鼠細(xì)胞) 豬腎細(xì)胞;PK(15) |
IL13RA2 Others Human 人 IL13RA2 / IL13R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 人卵巢腺癌細(xì)胞;SK-OV-3 |
人小梁網(wǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GTDC1 糖基轉(zhuǎn)移酶樣1抗體 規(guī)格 0.2ml | 人前列腺成纖維細(xì)胞RNAHPrF miRNA5 μg |
EGFL8： 表皮生長因子樣蛋白8抗體 0.2ml | Anti-EDG2/LPA1 溶血0脂酸受體蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
AQP-3(Mouse Aquaporin 3) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白3Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細(xì)胞 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
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