人臍帶間充質(zhì)干原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代成骨細(xì)胞 紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞 英文名稱： HEL（懸?。? PA12 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 1ml/T75 PANC-1, 人胰腺癌細(xì)胞 RF/6A 猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞 小鼠原代小腸隱窩上皮細(xì)胞

人臍帶間充質(zhì)干原代細(xì)胞

臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是一種能分化成骨細(xì)胞,、脂肪細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的多能干細(xì)胞,。其具有強大的增殖能力，且參與構(gòu)成造血微環(huán)境,，因此被廣泛應(yīng)用于組織工程，細(xì)胞治療和基因治療,。

產(chǎn)品名稱：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞

組織來源：臍帶

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用Procell配套的培養(yǎng)基和正確的培養(yǎng)方法來培養(yǎng)、傳代,，以此保證細(xì)胞具備良好的增殖和分化能力,。

產(chǎn)品用途：

本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面,。

方法簡介

臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu),。原來是由羊膜包卷著卵黃囊和尿膜的柄狀伸長部而形成的。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈,。當(dāng)卵黃囊及其血管退化，臍動脈和臍靜脈就發(fā)達(dá)起來,，在這些間隙中可以看到疏松的膠狀的間充質(zhì),。在子宮中，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細(xì)血管,，與胎盤的子體部胎兒毛細(xì)血管靠近,，在此處母體和胎兒的血液間進(jìn)行CO2和O2，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換,。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。后由子宮靜脈將來自胎???

質(zhì)量檢測

本產(chǎn)品經(jīng)過了細(xì)菌,、真菌,、霉菌、支原體檢測,。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。