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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人皮膚肥大采用膠原酶-混合消化法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人皮膚肥大經(jīng)MCG-35免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人皮膚肥大原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 皮膚組織 |
英文名稱 | Human Skin Mast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7355 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人皮膚肥大細(xì)胞分離自皮膚組織,；皮膚肥大細(xì)胞廣泛分布于皮膚微血管周圍，分泌多種細(xì)胞因子,，參與免疫調(diào)節(jié)（T細(xì)胞,、B細(xì)胞、APC細(xì)胞活化）,。皮膚肥大細(xì)胞表達(dá)MHC分子,、B7分子，具有APC功能,。表達(dá)大量的IgE-Fc受體,，釋放過(guò)敏介質(zhì)。具有弱吞噬功能,，和血液的嗜堿粒細(xì)胞同樣,，具有強(qiáng)嗜堿性顆粒的組織細(xì)胞。存在于血液中的這類顆粒，含有肝素,、組織胺,、5-羥色胺，由細(xì)胞崩解釋放出顆粒以及顆粒中的物質(zhì),，可在組織內(nèi)引起速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)（炎癥）,。由于在肥大細(xì)胞上結(jié)合的IgE抗體和抗原的接觸，使細(xì)胞多陷于崩壞,。肥大細(xì)胞呈圓形或卵圓形,，細(xì)胞核小，呈圓形或橢圓形,，染色淺,，位于細(xì)胞中央。細(xì)胞常成堆或單個(gè)分布于血管附近,。細(xì)胞呈圓形或卵圓形,，細(xì)胞質(zhì)中充滿大小一致、染成藍(lán)紫色的顆粒,，均勻分布在核周圍,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細(xì)胞 非洲綠猴腎,，BS-C-1細(xì)胞 hFOB 1.19(SV40 轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞) | Hyp(Mouse hydroxyproline) ELISA KIT 小鼠羥脯酸 96T |
RNF111： 環(huán)指蛋白111抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh RAB4 癌基因RAS相關(guān)蛋白Rab4A抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HCN4/FITC 熒光素標(biāo)記環(huán)化核苷酸調(diào)控陽(yáng)離子通道蛋白亞型4IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C9ORF43： 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BRN4/POU3F4 腦轉(zhuǎn)錄因子4蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CTBP1/FITC 熒光素標(biāo)記C端結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
酪蛋白激酶受體A2抗體 Anti-EphA2 R 0.1ml | phospho-alpha Adducin (Thr445)： 0酸化內(nèi)收蛋白抗體 0.1ml |
人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素素瘤細(xì)胞;OCM-1A | HCCLM3 人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞 |
AAV-293人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line AAV-293 DMEM+10%FBS | TNF Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A / Cachectin 蛋白 |
表皮黑色素細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人上皮細(xì)胞;Ca Ski |
CL-0266LS 180(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | CL-0063CNE(人鼻咽癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
人星形膠質(zhì)細(xì)胞 人肺癌細(xì)胞，NCI-H1869[H1869]細(xì)胞 YAC-1(淋巴瘤細(xì)胞) | 人皮膚肥大原代細(xì)胞C9ORF43： 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體 0.2ml |
大隱靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 801-D細(xì)胞,，人巨細(xì)胞性肺癌細(xì)胞 轉(zhuǎn)入Tet-off調(diào)控,，含EGFP基因的CHO細(xì)胞,CHO-AA8細(xì)胞 CM-M026小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
人食道平滑肌細(xì)胞 (HESMC)( 5×105 ) RN-s, 大鼠紋狀體元 Rattus | 牦牛皮膚細(xì)胞;BMU-S1 |
人正常肺上皮細(xì)胞;BEAS-2B | IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GTF2B 通用轉(zhuǎn)錄因子GTF2B抗體 規(guī)格 0.2ml | 人前列腺成纖維細(xì)胞HPrF |
Epsin2B： Epsin2B蛋白抗體 0.2ml | Anti-LOX-1/OLR1 凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
AQP-4(Mouse Aquaporin 4) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素素瘤細(xì)胞;OCM-1A |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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