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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腦微血管內(nèi)皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法,、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腦微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人腦微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腦組織 |
英文名稱 | Human Brain Microvascular Endothelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7396 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腦組織,；腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的主要組成成分,，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，能夠限制可溶性物質(zhì)和細(xì)胞等從血液進(jìn)入大腦,，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與外周內(nèi)皮細(xì)胞相比具有一些相同特性,。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對(duì)維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓,、抗血栓形成等有重要作用,，在腦血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。與外周內(nèi)皮細(xì)胞相同,，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)細(xì)胞粘附分子,，調(diào)控白細(xì)胞進(jìn)入大腦。由于微血管內(nèi)皮細(xì)胞的器官特異性,，內(nèi)皮細(xì)胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織,。其主要特征如下：①腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存在許多細(xì)胞間緊密連接，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗,，延遲細(xì)胞旁的通量,；②腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺乏內(nèi)皮細(xì)胞的窗孔結(jié)構(gòu)，其液相物質(zhì)胞飲水平較低,；③腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有不對(duì)稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng),，從而產(chǎn)生“兩極分化"的表現(xiàn)型。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品：
魚源細(xì)胞 | CXCR3 ELISA Kit 大鼠CXC趨化因子受體3Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
phospho-alpha B Crystallin (Ser45)： 0酸化α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體 0.1ml | GATA3： GATA結(jié)合蛋白3抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh Centaurin γ1 中心體肌動(dòng)蛋白γ1抗體(增強(qiáng)型PI3K蛋白) 規(guī)格 0.2ml | PCDHA8： 原鈣粘附蛋白α8抗體 0.2ml |
Anti-Nogo-A/NEP /FITC 熒光素標(biāo)記軸索過度生長抑制因子-A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8) 生長分化因子8抗原 0.5mg |
rec Protein A/FITC 熒光素標(biāo)記重組化蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml | MARCO： 巨噬細(xì)胞清道夫受體抗體 0.2ml |
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人腦瘤細(xì)胞;SF17 | 人臍帶間葉干細(xì)胞(臍帶)(HUMSC) (5×105) |
TNFSF13B Others Human 人 BAFF / TNFSF13B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CPB2 Others Mouse 小鼠 Carboxypeptidase B2 / CPB2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
HAVCR2 Others Human 人 TIMD3 / TIM3 / HAVCR2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | HOC1細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞 C3H小鼠骨肉瘤細(xì)胞,LM8細(xì)胞 食管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-4B3 | 人腦微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞PCDHA8： 原鈣粘附蛋白α8抗體 0.2ml |
SK-N-SH細(xì)胞,，母細(xì)胞瘤 人肺腺鱗癌細(xì)胞,NCI-H596細(xì)胞 人腦血管平滑肌細(xì)胞 | 人急性早幼粒白血病細(xì)胞;HL-60 |
人肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
HA Others H13N8 甲型流感 H13N8 (A/black-headed gull/Netherlands/1/00) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Anti-IL-6/FITC 熒光素標(biāo)記白介素6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-RIP3 受體結(jié)合絲蘇激酶3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | RLFs, 大鼠肺成纖維細(xì)胞 R1000細(xì)胞 WISH(羊膜細(xì)胞) |
Rhesus antibody Rh Phospho-NPM (Ser4) 0酸化核仁0酸蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHL20 Kelch樣蛋白20抗體 規(guī)格 0.2ml |
HBcAb 乙型肝炎核心抗體 96T | HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
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