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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞先用蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化結(jié)合專用培養(yǎng)基篩選法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人脈絡(luò)膜黑色素經(jīng)Dopa染色檢測，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人脈絡(luò)膜黑色素原代細(xì)胞 | 組織來源 | 脈絡(luò)膜組織 |
英文名稱 | Human Choroidal Melanocyte cells | 貨號(hào) | YS-01X7692 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞分離自眼球脈絡(luò)膜組織,；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞,，對(duì)外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差,，當(dāng)眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過體傳到后極部時(shí)，堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用,，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血,。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視乳頭部有照膜,，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū),。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織,、小血管和毛細(xì)血管組成,，軟而薄，棕紅色,，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間,，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層,，其含有的豐富色素起遮光暗房作用,。主要功能是營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及體，并有遮光作用,，使反射的物象清楚,。同時(shí)對(duì)視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用，對(duì)整個(gè)視覺有調(diào)節(jié)作用,。續(xù)連于睫狀體后方,，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營養(yǎng)和遮光作用,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次,；
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 長梭形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
原代成纖維細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml | Neurokinin A： 激肽A抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh MDMX MDM2樣P53蛋白結(jié)合抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Transthyretin /FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TLR3 (Toll-like receptor 3) Toll樣受體3抗原 0.5mg | Anti-OAS1 寡腺苷酸合成酶-1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Anti-FSH-R/FITC 熒光素標(biāo)記促卵泡刺激素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC6A19 依賴鈣交換蛋白6 規(guī)格 0.1ml |
Anti-Pdx1/FITC 熒光素標(biāo)記胰十二指腸同源異型盒基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-AR(phospho Ser213/Ser791)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化雄激素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
PKM Others Mouse 小鼠 PKM2 / OIP3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 人胚腎細(xì)胞;293FT 人腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | KLK6 Others Human 人 KLK6 / Kallikrein 6 / Neurosin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
HA Others H12N5 甲型流感 H12N5 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CD36 Others Rat 大鼠 CD36 / SCARB3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
CD274 Others Human 人 B7-H1 / CD274 / PD-L1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | LTA4H Others Human 人 Leukoiene A4 Hydrolase / LTA4H 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256 | 人脈絡(luò)膜黑色素原代細(xì)胞Anti-OAS1 寡腺苷酸合成酶-1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
CD38 Others Cynomolgus 食蟹猴 SCARB3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CD70 Protein Rat 重組大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
牛腎細(xì)胞;MDBK | TDGF1 Others Human 人 TDGF1 / CRGF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
豹貓肌肉成纖維樣細(xì)胞;LCM4 中國倉鼠體細(xì)胞,，R 1610細(xì)胞 IAR20細(xì)胞,，大鼠肝細(xì)胞 | GIG8： DNA結(jié)合抑制因子2抗體 0.1ml |
Human leucocyte antigen B27,HLA-B27 ELISA Kit 人類白細(xì)胞抗原B27Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | SEMA4D Others Rat 大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
間皮素抗體 Anti-MSLN 0.1ml | OXR(Human Orexin receptor) ELISA Kit 人食欲素受體 96T |
phospho-AANAT (Thr29)： 0酸化芳香胺N-乙酰化轉(zhuǎn)移酶抗體 0.1ml | PKM Others Mouse 小鼠 PKM2 / OIP3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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