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詳細(xì)介紹
人淋巴結(jié)成纖維原代細(xì)胞
人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞分離自淋巴組織,；淋巴結(jié)是呈橢圓形或蠶豆形的淋巴組織小體,，大小不一,，新鮮時(shí)呈灰紅色,。穿插于淋巴管的行程中,，并與淋巴管相通連,。淋巴結(jié)主要由淋巴組織和淋巴竇組成，外面包以致密結(jié)締組織被膜,，被膜向淋巴結(jié)內(nèi)伸入,，形成許多間隔或小梁,，構(gòu)成淋巴結(jié)的網(wǎng)狀支架，并把淋巴結(jié)實(shí)質(zhì)分隔成許多部分,。這些結(jié)締組織由成纖維細(xì)胞構(gòu)成,，對(duì)淋巴管起到保護(hù)和支持作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開(kāi)始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長(zhǎng),，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng),，平坦,、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。
英文名稱 | Human Lymph Node Fibroblast Cells | 組織來(lái)源 | 淋巴 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8300 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞
組織來(lái)源：淋巴
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS、bFGF,、Insulin,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的人淋巴結(jié)成纖維采用混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的人淋巴結(jié)成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞特制基礎(chǔ)無(wú)血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml | Orexin A ELISA Kit 大鼠阿立新AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1orf168： 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框168抗體 0.2ml | GCN2： 蛋白激酶GCN2蛋白抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh CEP55 中心體蛋白55kDa抗體 規(guī)格 0.2ml | Prostatic Acid Phosphatase： 前列腺酸性0酸酶抗體 0.2ml |
Anti-Nociceptin/FITC 熒光素標(biāo)記孤菲肽/痛敏肽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | GFP 綠色熒光蛋白 0.5mg |
IgG/FITC 熒光素標(biāo)記驢抗羊IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml | (C1F3)： 單克隆抗體 0.1ml |
RK1 Others Rat 大鼠 kA / RK1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | REG1A Others Human 人 REG1A / PSPS 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHBMEC NA | KYNU Others Mouse 小鼠 KYNU / Kynureninase 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
FOLR1 Others Human 人 FOLR1 / Folate receptor alpha 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | TNFRSF18 Others Rat 大鼠 GI / TNFRSF18 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | P815小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞 P815 mouse mastocytoma cell DMEM培養(yǎng)基+10%FBS |
艾氏腹水瘤瘤株;Ehrlich | 人淋巴結(jié)成纖維原代細(xì)胞Prostatic Acid Phosphatase： 前列腺酸性0酸酶抗體 0.2ml |
人導(dǎo)管癌細(xì)胞;ZR-75-1 大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞;THP-1 |
腎系膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105次方(1ml) | LRP11 Others Human 人 LRP11 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
HREpC-c 人腎上皮細(xì)胞(HREpC) 500,000cells 人小膠質(zhì)細(xì)胞HM | Anti-IL-4R/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素4受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-Rho C RhoC抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | BGC-823細(xì)胞,，人低分化胃癌細(xì)胞 人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,SW038-C2細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞;B95-8 |
Rhesus antibody Rh phospho-NFKB p65(Ser529) 0酸化細(xì)胞核因子抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHL23 Kelch樣蛋白23抗體 規(guī)格 0.2ml |
HBeAg(立可讀) 乙型肝炎e抗原 96T | RK1 Others Rat 大鼠 kA / RK1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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