化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
?
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人淋巴管內(nèi)皮采用蛋白酶消化法結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人淋巴管內(nèi)皮經(jīng)VEGFR3免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人淋巴管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 淋巴管 |
英文名稱(chēng) | Human Lymphatic Endothelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7107 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞分離自淋巴管組織,；淋巴管由毛細(xì)淋巴管匯合而成。其形態(tài)結(jié)構(gòu)與靜脈相似,，但管徑較細(xì),，管壁較薄，瓣膜較多且發(fā)達(dá),，外形呈串珠狀,。淋巴管根據(jù)其位置分為淺、深二種,。它們管位于皮下,，常與淺靜脈伴行，收集皮膚和皮下組織的淋巴,。深淋巴管與深部血管伴行,，收集肌肉和內(nèi)臟的淋巴。淺,、深淋巴管之間有廣泛的交通支,。淋巴管在向心行程中，通常經(jīng)過(guò)一個(gè)或多個(gè)淋巴結(jié),，從而把淋巴細(xì)胞帶入淋巴液,。主要功能是濾過(guò)淋巴液，產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞,，參與機(jī)體的免疫反應(yīng),。當(dāng)局部感染時(shí)，細(xì)菌,、病毒或癌細(xì)胞等可沿淋巴管侵入,，引起局部淋巴結(jié)腫大。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們,，則病變可沿淋巴管的流注方向擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移,。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞（LEC）是襯覆于淋巴管內(nèi)表面的一種單層扁平上皮,，是構(gòu)成淋巴管壁的主要結(jié)構(gòu)，參與維持體液平衡,，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞再循環(huán)和機(jī)體的免疫反應(yīng)和組織液及蛋白質(zhì)的運(yùn)輸,，在疾病過(guò)程中也起著重要作用。近年研究表明,，LEC還在傷口愈合,、淋巴管水腫和炎癥擴(kuò)散等病理過(guò)程中起重要作用，而且與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān),。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞主要功能：①調(diào)節(jié)體液,、蛋白和組織壓力平衡；②為免疫系統(tǒng)的重要組成部分,。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞與主要病生理變化：①囊腫型淋巴管瘤,；②淋巴管炎；③淋巴結(jié)核,。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;Lec1 高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞，HO-8910PM細(xì)胞 SCF細(xì)胞,，白鰱尾鰭細(xì)胞 | ART5： 二0酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶5抗體 0.2ml |
Anti-VSV-G tag VSV-G tag標(biāo)簽抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | Rhesus antibody Rh ABHD13 水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Caspase-13/FITC 熒光素標(biāo)記半胱胺酸蛋白酶蛋白-13抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFN gamma 干擾素-γ抗體 規(guī)格 0.1ml |
ARIP2a(Activin receptor 2A) 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗原 0.5mg | Heamachrome： 血紅素抗體 0.2ml |
IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM161A FAM161A蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞;HK-2 | mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞 |
RLF, 大鼠淋巴成纖維細(xì)胞 STJ.EPI.H7細(xì)胞 COS-1(SV40 轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞) | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT 116 [HCT116] |
CM-M035小鼠肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠海馬膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) Mouse |
敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21 | 白細(xì)胞介素-10超家族 |
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;C3H 10T1/2 2A6 小鼠腮腺細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人淋巴管內(nèi)皮原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh IFN gamma 干擾素-γ抗體 規(guī)格 0.1ml |
CT-26 WT 小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 | PDGFRA Others Human 人 PDGFRa / CD140a 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
團(tuán)頭魴尾鰭細(xì)胞;WCF 人卵巢畸胎瘤細(xì)胞,，PA-1細(xì)胞 SK-OV-3(卵巢癌細(xì)胞) | 子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細(xì)胞 | Rhesus antibody Rh IgG/Bio 標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml |
SDF-1a/CXCL12(Mouse Stromal cell derived factor 1a) ELISA Kit 小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a 96T | COLO 320(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
FAS (Apo-a1; CD95;)(抗原) 載脂蛋白-a1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | TRH(Human growth hormone releasing hormone) ELISA Kit 人促甲狀腺素釋放激素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MyoGEF： 肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體 0.2ml | 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞;HK-2 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
化工儀器網(wǎng)