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詳細(xì)介紹
人口腔角質(zhì)形成原代細(xì)胞
人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞分離自口腔組織,；口腔黏膜在組織學(xué)形態(tài)上分為上皮,、固有層和黏膜下層,；口腔黏膜上皮細(xì)胞按是否參與角化被分為角質(zhì)形成細(xì)胞與非角質(zhì)形成細(xì)胞,，主要由角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)成,；前者組成復(fù)層鱗狀上皮,，后者游離分布于上皮層內(nèi)。根據(jù)在口腔內(nèi)部位的不同,，復(fù)層鱗狀上皮可分為角化,、不全角化或無角化型等幾類。以角化型上皮為例,，由上皮的深面至淺面可分為基層,、棘層、粒層及角化層等四層。
英文名稱 | Human Oral Keratinocyte Cells | 組織來源 | 口腔 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8298 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞
組織來源：口腔
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的人口腔角質(zhì)形成采用先機械分離法,、后膠原酶消化法并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的人口腔角質(zhì)形成經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
A3細(xì)胞，淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 5-8轉(zhuǎn)基因鼻咽癌細(xì)胞系,F2-2細(xì)胞 CL-0330COLO 320DM(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | Rhesus antibody Rh Gibberellins 磺酸/β-氨基乙磺酸抗體 規(guī)格 0.1ml |
CC16(Human Clara cell protein) ELISA Kit 人克拉拉細(xì)胞蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml |
IGF II： 胰島素樣生長因子-II抗體 0.1ml | Cry Alpha(Human crystal proteins Alpha) ELISA Kit 人晶體蛋白α 96T |
Rhesus antibody Rh RIN1 RAS抑制蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-lamin A/FITC 熒光素標(biāo)記核纖層蛋白A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Thr489) 0酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | AIF ELISA Kit 大鼠凋亡誘導(dǎo)因子 96T |
中國倉鼠卵巢細(xì)胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF | 小鼠肝癌瘤株;H22 |
GBC-SD細(xì)胞,，人膽囊癌細(xì)胞 人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株,7WD10細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1 | Li-7(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
Balb/c小鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 Balb/c mouse bone marrow mesenchymal stem cells | ANGPTL1 Protein Canine 重組狗 ANGPTL1 / Angiopoietin-like 1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYM | 纖維母細(xì)胞粘附檢測試劑盒Fibro |
B16細(xì)胞,，人黑色素瘤細(xì)胞 植物乳桿菌 白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3/VP16-IL-2 | 人口腔角質(zhì)形成原代細(xì)胞Cry Alpha(Human crystal proteins Alpha) ELISA Kit 人晶體蛋白α 96T |
L6565 小鼠白血病克隆細(xì)胞系 | BTC Others Mouse 小鼠 BTC / Betacellulin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
FGFBP3 Others Human 人 FGFBP3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H028人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
人淋巴細(xì)胞;1301 | Rhesus antibody Rh ApoER2 載脂蛋白E2受體抗體 規(guī)格 0.1ml |
Bak： Bcl-2同源拮抗劑抗體 0.1ml | 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs) |
Anti-SPHK2/FITC 熒光素標(biāo)記鞘氨醇激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | P2Y4： P2Y4受體抗體 0.1ml |
Anti-CD158e/KIR3DL1/FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞抑制性受體3DL1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 中國倉鼠卵巢細(xì)胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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