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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人晶狀體上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人晶狀體上皮經(jīng)BFSP2（晶狀體蛋白）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人晶狀體上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 晶狀體組織 |
英文名稱 | Human Lens Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7404 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人晶狀體上皮細(xì)胞分離自晶狀體組織,；晶狀體源自胚胎發(fā)育外胚層，僅含有上皮細(xì)胞及其產(chǎn)物,，晶狀體囊膜作為屏障將晶狀體與其它類型細(xì)胞分開,；因而，晶狀體上皮細(xì)胞培養(yǎng)既無和血管組織的干擾,，又不受其它類型細(xì)胞如成纖維細(xì)胞的污染,，保證了培養(yǎng)中細(xì)胞成分的單一性。晶狀體上皮細(xì)胞主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)晶狀體的生理平衡,，包括電解質(zhì)和液體的輸送,。在正常的發(fā)育過程中，晶狀體上皮細(xì)胞分化和成熟,，然后遷移到晶狀體內(nèi)部,，產(chǎn)生晶體蛋白，自身也拉長而變成晶狀體纖維細(xì)胞,，并終失去細(xì)胞核和其它的細(xì)胞器,。研究表明，晶狀體上皮細(xì)胞的分化和極化受到了眼部液體中的生長因子的調(diào)控,，包括表皮生長因子和胰島素等,。細(xì)胞貼壁后為扁平不規(guī)則多角形，呈單層生長,、連成膜狀,。晶狀體上皮細(xì)胞是緊密貼附于晶狀體前囊內(nèi)表面的單層上皮細(xì)胞，其異常增殖和分化與白內(nèi)障和后囊混濁的發(fā)生密切相關(guān),，體外培養(yǎng)是研究其生長規(guī)律的主要手段,。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
原代骨骼肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml | Casp-9 ELISA Kit 大鼠胱天蛋白酶9Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1orf170： 1號染色體開放閱讀框170抗體 0.2ml | GPR78： G蛋白偶聯(lián)受體GPR78蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CEP76 中心體蛋白質(zhì)76抗體 規(guī)格 0.2ml | PAR6： 缺陷性分配同源物α抗體 0.2ml |
Anti-Nm23-H2/FITC 熒光素標(biāo)記抑制基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | GFP 綠色熒光蛋白 0.5mg |
Donkey Anti-rabbit/FITC 熒光素標(biāo)記驢抗兔IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml | (2F11)： 單克隆抗體 0.1ml |
IB3 Others Human 人 IB3 / B3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TNFRSF9 Others Human 人 4-1BB / CD137 / TNFRSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人腦血管平滑肌細(xì)胞cDNAHBVSMC cDNA | NRN1L Others Human 人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
C4-2(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 T-111B木瓜蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T] | CD302 Others Rat 大鼠 CD302 / CLEC13A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HUVEC-c pre-screened 預(yù)選型正常人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) 500,000cells 大隱靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | COC1細(xì)胞,，人卵巢癌細(xì)胞 大鼠骨肉瘤細(xì)胞,VMR106細(xì)胞 視網(wǎng)膜muller細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
白鰱尾鰭細(xì)胞系;SCF | 人晶狀體上皮原代細(xì)胞PAR6： 缺陷性分配同源物α抗體 0.2ml |
HEC-1-B人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-B human endomeial adenocarcinoma cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS | 人急性T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞;I 2.1(CRL-2572) |
CL-0169NCI-N87(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | HA Others H6N4 甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Anti-IL-4/FITC 熒光素標(biāo)記抗白介素4抗體(人)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-RhoA RhoA抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT 116 [HCT116] 大鼠腎足突細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Rhesus antibody Rh Phospho-NFKB1(Ser338) 0酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHL24 Kelch樣蛋白24抗體 規(guī)格 0.2ml |
HBeAb(立可讀) 乙型肝炎e抗體 96 | IB3 Others Human 人 IB3 / B3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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