人筋膜成纖維原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代羊膜間質(zhì)細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 英文名稱(chēng)： Caco-2 SCF 白鰱尾鰭細(xì)胞系 1ml/T75 H9c2大鼠心肌細(xì)胞（ATCC來(lái)源） HSCT6 大鼠肝星狀細(xì)胞 大鼠原代肺泡巨噬細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的人筋膜成纖維采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的人筋膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人筋膜成纖維細(xì)胞分離自筋膜組織,；筋膜，解剖結(jié)構(gòu)名,。指肌肉的堅(jiān)韌部分,。附于骨節(jié)者為筋，包于肌腱外者為膜,。是聯(lián)絡(luò)關(guān)節(jié),、肌肉，主 司運(yùn)動(dòng)的組織,。為肝所主,，并賴(lài)肝血的滋養(yǎng)。筋膜是一類(lèi)結(jié)締組織,，結(jié)締組織除了筋膜還有其他表現(xiàn)的形式,，如腱、韌帶,、腱膜和疤痕組織,。在不同的地方結(jié)締組織也有著不同的名稱(chēng)：腦和脊髓周?chē)氖悄X膜；骨周?chē)枪悄?；心臟周?chē)切陌?；腹腔?nèi)表面的是腹膜；在皮下層包圍整個(gè)身體和封閉肌肉和肌群的叫筋膜,。筋膜位于肌肉的表面,，分為淺筋膜和深筋膜兩種。（1）淺筋膜位于皮下,，又稱(chēng)皮下筋膜,，由疏 松結(jié)締組織構(gòu)成,，其內(nèi)含有脂肪、淺靜脈,、皮以及淺淋巴結(jié)和淋巴管等,。脂肪的多少因身體部位、性別和營(yíng)養(yǎng)狀況不同,。臨床常作的皮 下注射,，即將藥液注入淺筋膜內(nèi)。（2）深筋膜 位于淺筋膜深面,，又稱(chēng)固有筋膜,，由致密結(jié)締組織構(gòu)成，遍于全身且互相連續(xù),。深筋膜包被 肌或肌群,、腺體、大血管和等形成筋膜鞘,。四肢的深筋膜,。伸入肌群之間與骨相連，分隔肌群,，稱(chēng)肌間隔,。成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織 的主要細(xì)胞成分，細(xì)胞呈梭形或扁的星狀,，具有突起,。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開(kāi)始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長(zhǎng),，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng),，平坦,、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

培養(yǎng)信息：

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培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS,、bFGF、Insulin,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

人筋膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

操作步驟：

1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周?chē)疂n吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀(guān)察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀(guān)察,。

公司產(chǎn)品：