人滑膜成纖維原代細(xì)胞(類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞 癌 英文名稱： A498 BOS-2 大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞 1ml/T75 5-8F, 人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系 Human C6/36 白紋伊蚊細(xì)胞 大鼠原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

人滑膜成纖維原代細(xì)胞(類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)

人滑膜成纖維細(xì)胞(類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)分離自滑膜組織,；滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu),，各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會(huì)累及滑膜,。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),，同時(shí)在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位,。骨關(guān)節(jié)炎(OA)以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣鳎洳±砀淖兝奂瓣P(guān)節(jié)的各個(gè)組成部分,，但絕不僅局限于軟骨,，還包括軟骨下骨、滑膜,、半月板和韌帶,。各組成部分的病理改變相互影響，相互作用,，共同加速關(guān)節(jié)的退變,。滑膜細(xì)胞是構(gòu)成滑膜層的大細(xì)胞群體,，是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),，它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中，基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布,?；び?span>A型(巨噬樣滑膜細(xì)胞),、B型(成纖維樣滑膜細(xì)胞)以及C型(樹突細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞)細(xì)胞組成。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種病因未明的慢性,、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病,。其特征是手、足小關(guān)節(jié)的多關(guān)節(jié),、對(duì)稱性,、侵襲性關(guān)節(jié)炎癥，經(jīng)常伴有關(guān)節(jié)外器官受累及血清類風(fēng)濕因子陽性,，可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形及功能喪失,。RA的發(fā)病可能與遺傳、感染,、性激素等有關(guān),。RA關(guān)節(jié)炎的病理主要有滑膜襯里細(xì)胞增生、間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤,，以及微血管的新生,、血管翳的形成及軟骨和骨組織的破壞等。體外培養(yǎng)人滑膜成纖維細(xì)胞(類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)對(duì)于研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病的發(fā)生機(jī)理,、治療具有重要意義,。

產(chǎn)品名稱：人滑膜成纖維細(xì)胞(類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)

組織來源：滑膜

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

人滑膜成纖維細(xì)胞(類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實(shí)驗(yàn)室分離的人滑膜成纖維細(xì)胞采用混合酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的人滑膜成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。