人滑膜成纖維原代細胞（骨性關節(jié)炎)公司出售的產品：大鼠原代下頜骨成纖維細胞 人表皮癌細胞 英文名稱： A431 BOS-1 大額牛皮膚成纖維樣細胞 1ml/T75 mCF, 小鼠成纖維細胞 WGHL1 白化金黃地鼠肺成纖維樣細胞 大鼠原代骨髓來源巨噬細胞

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細胞屬性：

方法簡介

實驗室分離的人滑膜成纖維細胞采用混合酶消化結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測

實驗室分離的人滑膜成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

 

細胞簡介：

人滑膜成纖維細胞（骨性關節(jié)炎）分離自滑膜組織,；滑膜組織是位于關節(jié)腔內面的內襯結構,，各種關節(jié)內疾病均會累及滑膜。而滑膜細胞是維持關節(jié)正常功能的重要組織結構,，同時在各種關節(jié)疾患中也是主要病變部位,。骨關節(jié)炎（OA）以關節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣鳎洳±砀淖兝奂瓣P節(jié)的各個組成部分,，但絕不僅局限于軟骨,，還包括軟骨下骨,、滑膜、半月板和韌帶,。各組成部分的病理改變相互影響,，相互作用，共同加速關節(jié)的退變,?；ぜ毎菢嫵苫拥拇蠹毎后w，是維持關節(jié)正常功能的重要組織結構,，它包埋在顆粒狀無定性的基質中,，基質內有分散的纖維分布?；び?span>A型（巨噬樣滑膜細胞）,、B型（成纖維樣滑膜細胞）以及C型（樹突細胞樣滑膜細胞）細胞組成。類風濕關節(jié)炎（RA）是一種病因未明的慢性,、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病,。其特征是手、足小關節(jié)的多關節(jié),、對稱性,、侵襲性關節(jié)炎癥，經常伴有關節(jié)外器官受累及血清類風濕因子陽性,，可以導致關節(jié)畸形及功能喪失,。RA的發(fā)病可能與遺傳、感染,、性激素等有關,。RA關節(jié)炎的病理主要有滑膜襯里細胞增生、間質大量炎性細胞浸潤,，以及微血管的新生,、血管翳的形成及軟骨和骨組織的破壞等。體外培養(yǎng)人類風濕關節(jié)炎滑膜成纖維細胞對于研究類風濕關節(jié)炎疾病的發(fā)生機理,、治療具有重要意義,。退行性骨關節(jié)病又稱骨關節(jié)炎（OA）、退行性關節(jié)炎,、老年性關節(jié)炎,、肥大性關節(jié)炎，是一種退行性病變,，系由于增齡,、肥胖、勞損,、創(chuàng)傷,、關節(jié)先天性異常、關節(jié)畸形等諸多因素引起的關節(jié)軟骨退化損傷,、關節(jié)邊緣和軟骨下骨反應性增生,。本病多見于中老年人群，好發(fā)于負重關節(jié)及活動量較多的關節(jié)（如,，頸椎,、腰椎、膝關節(jié),、髖關節(jié)等）,。過度負重或使用這些關節(jié)，均可促進退行性變化的發(fā)生,。臨床表現(xiàn)為緩慢發(fā)展的關節(jié)疼痛,、壓痛、僵硬,、關節(jié)腫脹,、活動受限和關節(jié)畸形等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、bFGF,、Insulin、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

人滑膜成纖維細胞（骨性關節(jié)炎）體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞培養(yǎng)方法：

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側,，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。

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