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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞,、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓樹突狀經(jīng)CD86免疫熒光鑒定,、細(xì) 胞 形態(tài)等綜合鑒定,，純度可達(dá)80%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人骨髓樹突狀原代細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞) | 組織來源 | 骨髓 |
英文名稱 | Human Bone Marrow Maturation Dendritic Cells | 貨號 | YS-01X8291 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人骨髓樹突狀細(xì)胞分離自骨髓,；骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞,。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌,、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此,，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨,、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,，稱為紅骨髓。出生時(shí),，紅骨髓充滿全身骨髓腔,，隨著年齡增大,，脂肪細(xì)胞增多,，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓DC細(xì)胞是由骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的,；樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞，典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長,，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,，細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則,，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突,，胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見吞噬泡,，具有較強(qiáng)的遷移能力，伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞，貼壁形態(tài)多樣,。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα,、LPS等誘導(dǎo)而成，多數(shù)呈懸浮生長,， 細(xì)胞呈圓形,，細(xì)胞體積進(jìn)一步增大，表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),，伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞,。未成熟DC細(xì)胞長時(shí)間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細(xì)胞尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志,，主要通過形態(tài)學(xué),、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定,。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80,、CD86等共刺激分子，進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞,，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,，處于啟動、調(diào)控,、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié),；未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化,、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,，不能激活T細(xì)胞的第二信號，可導(dǎo)致T細(xì)胞無能,，從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹突狀細(xì)胞表面CD80、CD86,、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低,，一般在30%以下。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形,，樹突狀
傳代特性：屬于高度分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
人骨髓樹突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml | GSK ELISA Kit 大鼠糖原合成酶激酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1orf177： 1號染色體開放閱讀框177抗體 0.2ml | phospho-GSK-3 Beta(Thr390)： 0酸化糖原合酶激酶3β抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh Ceruloplasmin 銅藍(lán)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | PCGF1： 表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體 0.2ml |
Anti-CD335/NKp46/NCR1/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞毒性受體NK-p46抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | GLP-1 peptide 胰高血糖素樣肽-1(多肽) 0.1mg |
Rabbit Anti-Meiiones Unguiculataus Milme-Edwauds/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗長爪沙鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml | Mkl1： myocardin相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體 0.2ml |
BTK Others Human 人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HBZY-1(大鼠腎小球系膜細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0369IR983F(大鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1 |
人尿道上皮細(xì)胞RNAHUC miRNA5 μg | FLT3LG Others Mouse 小鼠 FLT3L / Flt3 ligand 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
PDPN Others Human 人 PDPN / Podoplanin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
LLC-WRC 256(大鼠腹水癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CHL/IU [ CHL-11 ](中國倉鼠肺細(xì)胞) | OVAC細(xì)胞,，人卵巢癌細(xì)胞 猴腎C細(xì)胞,M145細(xì)胞 視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
扁桃體上皮細(xì)胞生長添加物TEpiCGS | 人骨髓樹突狀原代細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)PCGF1： 表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體 0.2ml |
SK-N-SH, 人母細(xì)胞瘤細(xì)胞 低轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞,96-C細(xì)胞 PLC/PRF/5(肝癌亞力山大細(xì)胞) | 人滑膜細(xì)胞HS |
小鼠單核巨噬細(xì)胞;J774A.1 | FZD4 Others Rat 大鼠 Frizzled-4 / FZD4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HHpC-c 人肝細(xì)胞(HHpC) 3-6 mio. 人支氣管平滑肌細(xì)胞HBSMC | Anti-phospho-IKK beta (Tyr466) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-Reprimo 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的糖基化蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | Caco-2細(xì)胞，結(jié)腸腺癌細(xì)胞 鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞株,L-M TK細(xì)胞 人細(xì)胞;Hela P10s-11F |
Rhesus antibody Rh phospho-IRS1(Ser332/336) 0酸化胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHL31 Kelch樣蛋白31抗體 規(guī)格 0.2ml |
FSH 促卵泡生成素 96T | BTK Others Human 人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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