化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞,、培養(yǎng)過(guò)程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓樹(shù)突狀經(jīng)CD86免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人骨髓樹(shù)突狀原代細(xì)胞(DC細(xì)胞) | 組織來(lái)源 | 骨髓 |
英文名稱(chēng) | Human Bone Marrow Maturation Dendritic Cells | 貨號(hào) | YS-01X7565 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞,。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌,、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此,，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨,、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,，稱(chēng)為紅骨髓。出生時(shí),，紅骨髓充滿全身骨髓腔,，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多,，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細(xì)胞是由骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的,；DC細(xì)胞,，全稱(chēng)樹(shù)突狀細(xì)胞(DC),，是近年來(lái)倍受們關(guān)注的專(zhuān)職抗原呈遞細(xì)胞(APC)，能攝取,、加工及呈遞抗原,，啟動(dòng)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。由美國(guó)學(xué)者Steinman于1973年在淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn),，從脾臟中分離出一類(lèi)與粒細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞形態(tài)和功都不同的白細(xì)胞，因其細(xì)胞膜向外伸出,，形成與細(xì)胞軸突相似的膜性樹(shù)狀突起,，故而命名為樹(shù)突狀細(xì)胞。未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力,，成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞,，處于啟動(dòng)、調(diào)控,、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié),。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 半貼半懸浮
細(xì)胞形態(tài) 樹(shù)突狀
傳代特性 屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
VERO C1008 (E6)非洲綠猴腎細(xì)胞 VERO C1008 (E6) of African green monkey kidney cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | A1CF： 載脂蛋白B-mRNA編碼蛋白抗體 0.2ml |
Anti-FLAG Tag(CT) FLAG Tag標(biāo)簽抗體(C端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | Rhesus antibody Rh ABHD5 自水解酶結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Caspase-9/FITC 熒光素標(biāo)記白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFNA16/Interferon alpha 16 干擾素α16抗體 規(guī)格 0.2ml |
N-coR1 (Nuclear receptor co-repressor 1) 核受體輔助抑制因子(抗原) 0.5mg | HDAC3： 組蛋白去乙?；?span>3抗體 0.1ml |
sIgA/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM21C FAM21C蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
IFNA1 Protein Rat 重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (His 標(biāo)簽) | 骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 Adult bone marrow mesenchymal stem cells |
A172細(xì)胞,，人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 桔青霉 人表皮黑色素細(xì)胞-深色素RNAHEM-d miRNA5 μg | RWPE-2(人前列腺正常細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
CL-0372KATO III(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG] |
大鼠成年表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | EB (NBL-4) (牛胚氣管細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs) 人纖維肉瘤，HT-1080細(xì)胞 SW 900 [SW-900; SW900](人肺癌細(xì)胞) | 人骨髓樹(shù)突狀原代細(xì)胞(DC細(xì)胞)Rhesus antibody Rh IFNA16/Interferon alpha 16 干擾素α16抗體 規(guī)格 0.2ml |
小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Fox-NY | EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
973細(xì)胞,，人肺癌細(xì)胞 小鼠成骨細(xì)胞系,MC3T3-E1細(xì)胞 CL-0138Lec1(倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 支氣管成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
H9c2大鼠心肌細(xì)胞(ATCC來(lái)源) | Rhesus antibody Rh IgG/FITC FITC標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.3ml |
大鼠抗IgE受體抗體ELISA Kit 大鼠抗IgE受體抗體 96T | 615小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞肉瘤瘤株;DCS |
SARS S-protein(抗原) Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | DHEA(Human Dehydroepiandrosterone) ELISA Kit 人脫氫表雄酮Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MAS1L： G蛋白偶聯(lián)受體MAS相關(guān)蛋白抗體 0.2ml | IFNA1 Protein Rat 重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)