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人骨髓來源內(nèi)皮祖原代細(xì)胞
人骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞,。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌,、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此,，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨（如肱骨,、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,，稱為紅骨髓。出生時(shí),，紅骨髓充滿全身骨髓腔,，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多,，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。內(nèi)皮祖細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞,，亦稱為成血管細(xì)胞（Angioblast）,，是一群具有游走特性，能進(jìn)一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞,，缺乏成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型,，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu)，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù)。研究顯示,，內(nèi)皮祖細(xì)胞在心腦血管疾病,、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用,，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路,，EPCs生物學(xué)特性和治療作用的研究成為這一領(lǐng)域新的熱點(diǎn)。
英文名稱 | Human Bone Marrow-Derived Endothelial Progenitor Cells | 組織來源 | 骨髓 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7496 |
細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞
組織來源：骨髓
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代,；不建議多次傳代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓來源內(nèi)皮祖采用沖洗骨髓、密度梯度離心,、差速貼壁法結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓來源內(nèi)皮祖經(jīng)CD34免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
原代上皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml | Anti-Trk B 酪激酶B抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
GOD(Human glucose oxidase) ELISA Kit 人葡萄糖氧化酶 96T | Anti-Phospho-MKK3 (Ser189)/MKK6 (Ser207) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化原活化蛋白激酶MKK3/6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TLR2/CD282 Toll樣受體2抗體 規(guī)格 0.1ml | PI3K(Human Phosphotylinosital 3 kinase) ELISA Kit 人0酸肌醇3激酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
Phospho-HER4 (Tyr1162)： 0酸化HER4抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh CCDC125 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體 規(guī)格 0.2ml |
FGFBP1： 纖維細(xì)胞生長因子結(jié)合蛋白抗體 0.1ml | 1,3- BetaD-Glu ELISA Kit 大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
IL1R2 Others Rat 大鼠 IL1R2 / IL1RB / CD121b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 人胚胎心肌組織來源細(xì)胞;CCC-HEH-2 人小氣道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人膀胱癌細(xì)胞;5637(HTB-9) | F3 Others Rat 大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
EPHA4 Others Mouse 小鼠 EPHA4 / HEK8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | DDR1 Others Human 人 DDR1 Kinase / CD167 (aa 444-913) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
Dami(人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞HVMF | HREpC Pellet 人類腎小管上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人心肌細(xì)胞cDNAHCM cDNA |
表達(dá)小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細(xì)胞;293KB | 人骨髓來源內(nèi)皮祖原代細(xì)胞PI3K(Human Phosphotylinosital 3 kinase) ELISA Kit 人0酸肌醇3激酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
PCSK9 Others Mouse 小鼠 PCSK9 / NARC1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 大鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
THP-1(人髓系白血病單核細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | Daudi細(xì)胞，人白血病細(xì)胞 小鼠腎足細(xì)胞,Mouse podocyte細(xì)胞 骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)基SkMCM-prf |
CDK1 Others Human 人 CDC2 Kinase / CDK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Anti-Profilin 1/FITC 熒光素標(biāo)記前纖維蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OXSR1： 氧化應(yīng)激反應(yīng)蛋白1抗體 0.2ml | IL13RA1 Others Mouse 小鼠 IL13Ra1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
SPP24： 分泌性0蛋白24抗體 0.2ml | C1ORF111： 1號(hào)染色體開放閱讀框111抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG whole serum 驢抗兔IgG抗血清 規(guī)格 1ml | IL1R2 Others Rat 大鼠 IL1R2 / IL1RB / CD121b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
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