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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人肝竇內(nèi)皮采用混合酶灌流消化、反復(fù)低速離心,、密度梯度離心法,，并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人肝竇內(nèi)皮經(jīng)CD31,、CD14免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人肝竇內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 肝臟組織 |
英文名稱 | Human Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7186 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞分離自肝臟組織,；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里大的器官,，位于機體中的腹部位置,，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,，胃的上方,。肝臟是機體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹,，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（SEC）是肝臟內(nèi)所占比例高的非實質(zhì)細(xì)胞,，位于肝竇腔與肝細(xì)胞之間,，具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運、吞噬,、抗原提呈,、免疫耐受等功能。SEC由于擁有一般細(xì)胞所沒有的窗孔結(jié)構(gòu),、細(xì)胞間連結(jié)松散、內(nèi)皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性,，從而達(dá)到快速交換各種大小分子的目的,。肝在遭到多種病原侵襲時，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞窗孔逐漸減少或消失,，內(nèi)皮下基膜形成,，產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)，這一過程稱為肝竇毛細(xì)血管化,。它由多種因素引起,，其過程極復(fù)雜,，在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn)，近年來受到廣泛關(guān)注,。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
Pt K1細(xì)胞,，長鼻袋鼠腎細(xì)胞 人胰腺腺癌細(xì)胞,Panc 10.05細(xì)胞 CM-M095小鼠成年表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | Rhesus antibody Rh GIMAP2 GTP酶IMAP家族成員2抗體 規(guī)格 0.2ml |
Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA Kit 人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-ablMulti-class antibodies規(guī)格： 48T | PE PE標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml |
IL-2： 白介素2抗體(大、小鼠) 0.2ml | t-PA ELISA Kit 大鼠組織型纖溶酶原激活劑 96T |
Rhesus antibody Rh RIP3 受體結(jié)合絲蘇激酶3抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-LEF-1/FITC 熒光素標(biāo)記淋巴增強因子-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Tie2 (Ser1119) 0酸化血管生成素受體2抗體 規(guī)格 0.1ml | sEPCR(Mouse soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 小鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體 96T |
大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1 | 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA |
AR42J細(xì)胞,，人胰腺細(xì)胞 人皮膚成纖維細(xì)胞系,BJ細(xì)胞 小鼠母細(xì)胞瘤細(xì)胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] | HT-29(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | PPBP Protein Human 重組人 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-C | 小鼠腸巨噬細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Malmc細(xì)胞,，人皮膚纖維微細(xì)胞系 光滑念珠菌 雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3 | 人肝竇內(nèi)皮原代細(xì)胞t-PA ELISA Kit 大鼠組織型纖溶酶原激活劑 96T |
草魚肝臟細(xì)胞;L8824 | 人胚胎絨毛細(xì)胞(HAF)(1×106 ) 細(xì)胞名稱 種屬 |
IL23 Others Marmoset 狨猴 IL23A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H021人前列腺平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
IFNA10 Protein Human 重組人 Ierferon alpha 10 / IFNA10 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) | Rhesus antibody Rh APP/ABPP APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
BRSK1： 絲酸/蘇酸蛋白激酶SAD-B抗體 0.2ml | 恒河猴腎細(xì)胞;LLC-MK2 |
Anti-VSIG4 /FITC 熒光素標(biāo)記T淋巴細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PAFAH： 脂蛋脂酶A2抗體 0.1ml |
Anti-CD141/FITC 熒光素標(biāo)記凝血調(diào)節(jié)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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