人肝動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 SK-N-BE(2) (人母細(xì)胞瘤細(xì)胞) Caki-2 人透明細(xì)胞癌細(xì)胞 1ml/T75 Hela, 人細(xì)胞系 Human LTK- 小鼠缺胸腺激酶L細(xì)胞 大鼠原代腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞

人肝動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞

人肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肝動(dòng)脈組織,；在胚胎期，肝臟有3條動(dòng)脈供血,，分別來(lái)源于胃左動(dòng)脈,、腹腔動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈，這3條動(dòng)脈分別的不同部位,。出生后,，一般保留一條動(dòng)脈，大部分為起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈,，由其分出左,、右肝動(dòng)脈左、右半肝,。偶爾也可見起源于胃左動(dòng)脈的動(dòng)脈或起源于腸系膜上動(dòng)脈的動(dòng)脈,。但也有2條動(dòng)脈并存的情況，如起源于腹腔動(dòng)脈和起源于胃左動(dòng)脈（25%）,，起源于腹腔動(dòng)脈和起源于腸系臘上動(dòng)脈（10%）,，而起源于胃左動(dòng)脈和起源于腸系膜上動(dòng)脈的2條動(dòng)脈同時(shí)存在的情況比較少見。此外,，還有5%像胚胎期一樣,，3條動(dòng)脈同時(shí)存在。這種起源于腹腔動(dòng)脈以外的肝動(dòng)脈稱為迷走肝動(dòng)脈,，如果肝臟沒(méi)有起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈供血時(shí),，此種異位起源的肝動(dòng)脈稱替代動(dòng)脈，如果在常見肝動(dòng)脈類型外,，還有一支這種異位起始的動(dòng)脈的一部分血流,，這種肝動(dòng)脈稱副肝動(dòng)脈。肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是襯于肝動(dòng)脈內(nèi)表面的單層扁平上皮，在炎癥時(shí)高表達(dá)黏附分子,，與血流中白細(xì)胞表面黏附分子相互作用,，從而介導(dǎo)白細(xì)胞穿越血管壁，亦屬一類非專職抗原提呈細(xì)胞,。它們吞噬異物,、細(xì)菌、壞死和衰老的組織,，還參與集體免疫活動(dòng),，包括：①血管收縮及血管舒張，從而控制血壓,；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解）,；③動(dòng)脈硬化；④血管生成,；⑤炎癥及腫脹（浮腫）,；⑥內(nèi)皮細(xì)胞亦控制一些物質(zhì)，如白血球進(jìn)出血管,。

產(chǎn)品名稱：人肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

組織來(lái)源：肝動(dòng)脈組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肝動(dòng)脈內(nèi)皮采用混合酶消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肝動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。