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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的癌組織源采用膠原酶消化、經(jīng)Percoll離心純化制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肝癌組織源經(jīng)檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人肝癌組織源原代細(xì)胞 | 組織來源 | 肝癌組織 |
英文名稱 | Human Hepatoma Tissue-Derived Cells | 貨號(hào) | YS-01X7438 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人肝癌組織源細(xì)胞分離自患有肝癌病人的肝癌組織；肝癌即肝臟惡性腫瘤,，可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類,。原發(fā)性肝臟惡性腫瘤起源于肝臟的上皮或間葉組織，前者稱為原發(fā)性肝癌,，是我國(guó)高發(fā)的,，危害極大的惡性腫瘤；后者稱為肉瘤,，與原發(fā)性肝癌相比較較為少見,。繼發(fā)性或稱轉(zhuǎn)移性肝癌系指全身多個(gè)器官起源的惡性腫瘤侵犯至肝臟。一般多見于胃,、膽道,、胰腺、結(jié)直腸,、卵巢,、子宮、肺,、乳腺等器官惡性腫瘤的肝轉(zhuǎn)移,。原發(fā)性肝癌的病因及確切分子機(jī)制尚不清楚,，目前認(rèn)為其發(fā)病是多因素、多步驟的復(fù)雜過程,，受環(huán)境和飲食雙重因素影響,。流行病學(xué)及實(shí)驗(yàn)研究資料表明，乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染,、黃曲,、飲水污染、酒精,、肝硬化,、性激素、亞硝胺類物質(zhì),、微量元素等都與肝癌發(fā)病相關(guān),。繼發(fā)性肝癌（轉(zhuǎn)移性肝癌）可通過不同途徑，如隨血液,、淋巴液轉(zhuǎn)移或直接侵潤(rùn)肝臟而形成疾病,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
原代系膜細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml | Anti-Phospho-TrkA (Tyr674/675)/TrkB (Tyr706/707) 0酸化酪激酶A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
NNE(Human non-neuronal enolase) ELISA Kit 人非元性烯醇化酶 96T | Anti-MK(Midkine) 熒光素標(biāo)記中期因子/肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TLR5 Toll樣受體5抗體 規(guī)格 0.1ml | HD(Human Histone Deacetylase) ELISA Kit 人組織蛋白去乙?；?span>Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HSD11B1： 羥基類固醇脫氫酶11β1抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh CCDC134 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白134抗體 規(guī)格 0.2ml |
FBXO4： FBXO4蛋白抗體 0.2ml | Eotaxin 1/CCL11 ELISA Kit 大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
VEGFA Others Human 人 VEGF 183 / VEGF-A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | HMy2.CIR(人B淋巴母細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 人皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4 |
人膀胱上皮永生化細(xì)胞;SV-HUC-1 | CSF1R Others Rat 大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CD55 Others Human 人 CD55 / DAF 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein (ECD 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CTLL-2(小鼠T細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人結(jié)膜成纖維細(xì)胞HConF | SK-MEL-1(人皮膚黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 V79(中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞) |
草魚肝臟細(xì)胞;L8824 | 人肝癌組織源原代細(xì)胞HD(Human Histone Deacetylase) ELISA Kit 人組織蛋白去乙?；?span>Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
CCL5 Others Human 人 CCL5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-H126人小腦顆粒細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 293001A細(xì)胞,，Sars蛋白表達(dá)株 人癌細(xì)胞,MDA-MB-436細(xì)胞 雪旺細(xì)胞培養(yǎng)基SCM-prf |
CD52 Others Rat 大鼠 CD52 / CDW52 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Anti-PRMT1/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)精甲基轉(zhuǎn)移酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Optimedin： 嗅球蛋白3抗體 0.2ml | T Others Human 人 ansthyretin / T / Prealbumin / PALB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
SPRR1a： 角質(zhì)蛋白α抗體 0.1ml | Collagen XI alpha 2： 膠原蛋白11A2抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml | VEGFA Others Human 人 VEGF 183 / VEGF-A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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