人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代膀胱成纖維細(xì)胞 SC-1(小鼠胚胎細(xì)胞) HELF 人胚肺成纖維細(xì)胞 1ml/T75 rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 NIH/3T3 小鼠胚胎細(xì)胞 大鼠原代膀胱平滑肌細(xì)胞

人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞

人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺小動(dòng)脈組織,；肺動(dòng)脈干是短而粗的動(dòng)脈，自右心室的動(dòng)脈圓錐起始，向左后上方斜升,，先在升主動(dòng)脈根部的前面，繼而至其左側(cè),，至主動(dòng)脈弓的下方,，約在第5胸椎高度，分為左,、右肺動(dòng)脈,。左肺動(dòng)脈較短，橫行向左,，經(jīng)左主支氣管前方至左肺門,，分兩支進(jìn)入左肺的上、下葉,。右肺動(dòng)脈較長(zhǎng),，橫行向右，經(jīng)主動(dòng)脈升部和上腔靜脈的后方達(dá)右肺門,，分3支進(jìn)入右肺上,、中、下葉。左,、右肺動(dòng)脈的各分支在肺實(shí)質(zhì)內(nèi)又反復(fù)分支,，與支氣管的分支伴行，后達(dá)肺泡壁,，形成稠密的毛細(xì)血管網(wǎng),。肺動(dòng)脈輸送的是含二氧化碳較多的靜脈血。在肺動(dòng)脈干分叉處稍左側(cè)與主動(dòng)脈弓下緣之間有一結(jié)締組織索,，稱動(dòng)脈韌帶,。管徑在0.3～1mm之間，為小動(dòng)脈（small-artery）,，小動(dòng)脈包括粗細(xì)不等的幾級(jí)分支,，也屬肌性動(dòng)脈。較大的小動(dòng)脈,，內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜,，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近,，一般沒有外彈性膜,。口徑在1mm以下的動(dòng)脈,，管壁有完整的平滑肌層及少量的彈性纖維和膠質(zhì)纖維,。小動(dòng)脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素，也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開關(guān)",。典型的小動(dòng)脈,，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對(duì)比其他動(dòng)脈為厚,，當(dāng)平滑肌在支配下強(qiáng)力收縮時(shí),，其管腔可以閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細(xì)血管內(nèi),，從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力。如果有許多小動(dòng)脈同時(shí)收縮,，可使血壓顯著上升,。反之，當(dāng)小動(dòng)脈的平滑肌舒張時(shí),，則可使大量的血液流入毛細(xì)血管,，外周阻力明顯下降，血壓降低,。終末小動(dòng)脈(terminal arteri-ole)的口徑為20～30μm,；后小動(dòng)脈(metar-teriole)，又稱毛細(xì)血管前小動(dòng)脈(precapil-lary arteriole)的口徑為12～15μm,。管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌,，在毛細(xì)血管前小動(dòng)脈分支的起始部分,，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細(xì)血管前括約肌(precapillary sphinc-ter),，其收縮或舒張,，可調(diào)節(jié)真毛細(xì)血管的血流量，是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開關(guān)",。支配小動(dòng)脈平滑肌的交感纖維,，可延伸到終末小動(dòng)脈和后小動(dòng)脈的平滑肌細(xì)胞。在毛細(xì)血管前括約肌上交感纖維特別豐富,。肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布,，該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì),、維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用,。

產(chǎn)品名稱：人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

組織來源：肺小動(dòng)脈

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS,、EGF,、bFGF、IGF,、VEGF,、Heparin、Hydrocortisone,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。