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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10? |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | YS-01X7023 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肺動(dòng)脈成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肺動(dòng)脈成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人肺動(dòng)脈成纖維原代細(xì)胞 | 組織來源 | 肺動(dòng)脈組織 |
英文名稱 | Human Pulmonary Artery Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7023 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞分離自肺動(dòng)脈組織,；肺動(dòng)脈亦稱肺動(dòng)脈干,。在呼吸空氣的脊椎動(dòng)物中，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動(dòng)脈。肺大動(dòng)脈起于右心室,，在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行,，在主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈,，經(jīng)肺門入肺,。肺動(dòng)脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動(dòng)脈干,。起自右心室,，在升主動(dòng)脈前方向左后上方斜行，至主動(dòng)脈弓下方分為左,、右肺動(dòng)脈,。左肺動(dòng)脈較短，在左主支氣管前方橫行,，分二支進(jìn)入左肺上,、下葉。右肺動(dòng)脈較長(zhǎng)而粗,，經(jīng)升主動(dòng)脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進(jìn)入右肺上,、中,、下葉。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),，在一定條件下,，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán),；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長(zhǎng),，平坦、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺動(dòng)脈的正常形態(tài)；合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì),；組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
人少突膠質(zhì)細(xì)胞 人肺癌細(xì)胞,，SK-MES-1細(xì)胞 P3X63Ag8.653(骨髓瘤細(xì)胞) | FE(Mouse ferritin) ELISA KIT 小鼠鐵蛋白 96T |
RDH11： 脫氫酶11/丙型肝炎病毒核心蛋白抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml |
Anti-HBA1/FITC 熒光素標(biāo)記人類血紅蛋白α1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CPB2： 胰羧肽酶B2抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BTBD1 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白1(丙型肝炎病毒的NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8)抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CRLR/CALCRL/FITC 熒光素標(biāo)記降鈣素受體樣蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
膠質(zhì)細(xì)胞谷運(yùn)載蛋白1 抗體 Anti-EAAT1/Glast 0.1ml | Annexin A10： 膜粘連蛋白10抗體 0.1ml |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;Caco-2 | 獼猴肌肉細(xì)胞;MMm7 |
615小鼠狀肺腺癌瘤株;P615 小鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 Mouse |
人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204 | 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A |
腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | CL-0034BHK-21(倉(cāng)鼠腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
MDA-MB-435S細(xì)胞,，癌細(xì)胞 人鼻咽癌細(xì)胞,HNE3細(xì)胞 CL-0292MKN45(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人肺動(dòng)脈成纖維原代細(xì)胞CPB2： 胰羧肽酶B2抗體 0.2ml |
大鼠纖維母細(xì)胞;1/EJ 1-1 | PC-12細(xì)胞，大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化) 22RV1(前列腺癌細(xì)胞) 人肝癌細(xì)胞;SMMC-7721 |
JAM3 Others Mouse 小鼠 JAM3 / JAM-C 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-2 |
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92MI [NK92MI] | Rabbit Anti-IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GZMB/Granzyme B 顆粒酶B抗體 規(guī)格 0.1ml | 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞RNAHUVEC miRNA5 μg |
ELAVL2： ELAVL2蛋白抗體 0.2ml | Anti-LIX1 LIX1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
E(Mouse estrogen) ELISA Kit 小鼠雌激素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;Caco-2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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