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詳細(xì)介紹
人肺大靜脈平滑肌原代細(xì)胞
人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞分離自肺大靜脈組織；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動(dòng)物中,，把動(dòng)脈血由肺送回心臟的靜脈,，是一個(gè)靜脈里流動(dòng)脈血的血管。左右1對(duì),，共4條,，兩條連接右肺，兩條連接左肺,。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接,，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動(dòng)脈高壓,，是由于肺靜脈內(nèi)血液淤滯而引起的肺動(dòng)脈高壓,。正常情況下，肺循環(huán)具有血壓低,、阻力小和順應(yīng)性大的特點(diǎn),，肺動(dòng)脈壓力高低取決于單位時(shí)間內(nèi)肺動(dòng)脈血流量和肺血管的阻力，要維持肺循環(huán)的低壓,、低阻的狀態(tài),，必須保證整個(gè)肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻，血液順利地由肺動(dòng)脈經(jīng)毛細(xì)血管進(jìn)入肺靜脈,，再入左心室,，經(jīng)過左心室收縮進(jìn)入體循環(huán)，才能避免肺動(dòng)脈內(nèi)壓力升高,。肺大靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形，核卵圓形,、居中,；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。該細(xì)胞參與血管壁炎癥反應(yīng),，保持靜脈管腔的通暢,，還是多數(shù)動(dòng)脈疾病的靶細(xì)胞。
英文名稱 | Human Pulmonary Great Vein Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 肺靜脈組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7017 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞
組織來源：肺靜脈組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肺大靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肺大靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
雜交瘤(B類);C3110D2E11 | IKB beta： 核因子κB抑制蛋白β抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Megsin 絲蛋白酶抑制劑B7抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TRA16 /FITC 熒光素標(biāo)記激素受體相關(guān)蛋白/孤兒素受體相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TRAF1 壞死因子受體相關(guān)因子1抗原 0.5mg | Anti-MT-ND1 NADH復(fù)合體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-phospho-FOXO4 (Ser262) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大,、小鼠叉頭蛋白4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLT/SLT-IIe/O139 豬水腫素(O139)菌體蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-APS(Ser598)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化APS抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
MAP2K1 Others Mouse 小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CD200R1 Others Human 人 CD200R1 / CD200R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人胚肺成纖維細(xì)胞;HFL-I | 大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(ROPC)(5×105) |
KiMA(人胚腎上皮細(xì)胞系) 5×106cells/瓶×2 艱難梭菌Closidium difficile | SERPINB2 Others Human 人 SerpinB2 / PAI-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
EL4(小鼠淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0255A875(人黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1 | FCGR3A Others Human 人 CD16a / FCGR3A CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人肺大靜脈平滑肌原代細(xì)胞Anti-MT-ND1 NADH復(fù)合體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
MERTK Others Human 人 MERTK / Mer (aa 578-872) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | PF4 Protein Human 重組人 CXCL4 / PF4 蛋白 |
腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IL2RB Others Human 人 IL2Rβ 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
SP2/0細(xì)胞,，骨髓瘤細(xì)胞 人經(jīng)典小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H1688細(xì)胞 CL-0404NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | GLUT12： 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12抗體 0.2ml |
Human 2,3-dinor thromboxane B2,2,3-dinor-TXB2 ELISA Kit 人2,3Dinor血栓烷B2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IFNW1 Others Human 人 IFN omega 1 / IFNW1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
壞死因子受體相關(guān)因子6抗體 Anti-TRAF6 0.2ml | PCT(Human Procalcitonin) ELISA Kit 人降鈣素原 96T |
ACADL： ?；摎涿搁L(zhǎng)鏈抗體 0.1ml | MAP2K1 Others Mouse 小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
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