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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人肺大動脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人肺大動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人肺大動脈內(nèi)皮原代細胞 | 組織來源 | 肺動脈組織 |
英文名稱 | Human Pulmonary Great Artery Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X6999 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人肺大動脈內(nèi)皮細胞分離自肺大動脈組織,；肺大動脈亦稱肺動脈干,。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動脈,。肺大動脈起于右心室,，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左,、右肺動脈,，經(jīng)肺門入肺。肺動脈干位于心包內(nèi),，為一粗短的動脈干,。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行,，至主動脈弓下方分為左,、右肺動脈,。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行,，分二支進入左肺上,、下葉。右肺動脈較長而粗,，經(jīng)升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行,，至右肺門處分為三支進入右肺上、中,、下葉,。細胞呈單層多角形鋪路石狀分布；該細胞在維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡,、合成和分泌細胞因子和介質(zhì),、維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡中起重要作用。肺大動脈內(nèi)皮細胞呈單層多角形鋪路石狀分布,，該細胞在維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡,、合成和分泌細胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡中起重要作用,。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
小鼠肝癌細胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6] 小鼠胰腺星狀細胞培養(yǎng)基 100mL | ANT-1： 腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 0.1ml |
Anti-HDAC12 組蛋白去乙?；?span>12抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ABL2 ABL2蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-Caspase-6 (NT)/FITC 熒光素標(biāo)記半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFN-Alpha/IFNA1/IFNA13/Interferon alpha 1 干擾素α抗體 規(guī)格 0.1ml |
ASCL1/MASH1(Achaete-scute homolog 1) 母細胞特異性轉(zhuǎn)移因子抗原 0.5mg | HSPB7： 熱休克蛋白β7抗體 0.2ml |
IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗人IgM 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM3C/ILEI 上皮分泌型FAM3C蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
人間充質(zhì)干細胞-臍帶 Human | NCI-H358 人非小細胞肺癌細胞 |
LX-2, 人肝星形細胞株 | 人臍靜脈平滑肌細胞 |
人小細胞肺癌細胞;NCI-H209 | 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞;NK-92 [NK92] |
CM-M059小鼠膀胱平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KM9401 |
貓腎細胞;CRFK 人胚腎細胞,293[HEK-293]細胞 Fox-NY細胞，小鼠骨髓瘤細胞 | 人肺大動脈內(nèi)皮原代細胞Rhesus antibody Rh IFN-Alpha/IFNA1/IFNA13/Interferon alpha 1 干擾素α抗體 規(guī)格 0.1ml |
人腦瘤細胞;SF17 | EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細胞裂解液 (陽性對照) |
UMR-106大鼠骨肉瘤細胞 Osteosarcoma cells in UMR-106 rats DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | 酶(含10mL 酶解緩沖液) 1mL |
EC109,，人食管癌細胞 | Rhesus antibody Rh IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml |
Gzms-B(Mouse granzymes B) ELISA Kit 小鼠顆粒酶B 96T | IL8 Protein Human 重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77) |
PSD-95 突觸后密度蛋白95(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | AChRab(Human acetylcholine receptor antibody) ELISA Kit 人乙酰受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MBNL3： 毒蕈堿樣蛋白3抗體 0.2ml | 人間充質(zhì)干細胞-臍帶 Human |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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