詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療!
細胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的人表皮角質(zhì)形成層細胞先蛋白酶消化,、后-膠原酶混合消化法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人表皮角質(zhì)形成經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 人表皮角質(zhì)形成原代細胞 | 組織來源 | 皮膚組織 |
英文名稱 | Human Epidermal Keratinocyte Cells | 貨號 | YS-01X7364 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
人表皮角質(zhì)形成細胞分離自皮膚組織;表皮位于動物皮膚的外層,,由胚胎時期外胚層形成,,具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu),,由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成,。從基底層到表面可分為五層,即基底層,、棘層,、顆粒層、透明層和角質(zhì)層,。表皮角質(zhì)形成細胞是一種能合成角質(zhì)蛋白的上皮細胞,,此類細胞為表皮的主體,,由表皮深層始逐漸增殖、分化,,并在成為角化的角質(zhì)細胞中,,細胞核與細胞器消失,細胞亦失去生理功能而脫落,。未脫落部分對機體尚有保護作用,,故不必在洗擦身體時用力搓擦,使其過早脫失,。表皮角質(zhì)形成細胞主要分布于表皮基底層,,在上皮程序性死亡后,細胞產(chǎn)生角化并移向表皮,。體外培養(yǎng)的表皮角化細胞容易導(dǎo)致終末分化,,不能充分增殖。角質(zhì)形成細胞終產(chǎn)生角質(zhì)蛋白,,在其向角質(zhì)細胞演變過程中,,一般可以分為四層,即基底層,、棘層,、顆粒層以及角質(zhì)層。有人把前三層或前二層稱為生發(fā)層或馬爾匹基層,。此外,,在某些部位,特別在掌跖部位,,角質(zhì)層下方還可見到透明層,。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,,待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,,每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,,每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍,。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品:
雜交瘤(B類);Z172A4C4C6F3G12 | CNP ELISA Kit 大鼠C型尿肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
C1orf192: 1號染色體開放閱讀框192抗體 0.2ml | GIPC1: 胰島素樣生長因子1受體相互作用蛋白1抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CGA/ Chromogranin A 嗜鉻粒素A抗體 規(guī)格 0.1ml | PTGFR: 前列腺素F2a受體抗體PGF2αR 0.2ml |
Anti-NKR/FITC 熒光素標(biāo)記激肽B受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | GRB2/ASH peptide 生長因子受體結(jié)合蛋白2抗原 0.5mg |
IgG/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗羊IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml | MTSS1: 轉(zhuǎn)移抑制蛋白1 0.1ml |
KIRREL3 Others Rat 大鼠 KIRREL3 / NEPH2 人細胞裂解液 (陽性對照) | 人臍帶動脈平滑肌細胞 (HUASMC)( 5×105 ) A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株 Human |
人胚肺成纖維細胞;MRC-5 | KLRB1F Others Mouse 小鼠 KLRB1F / NKR-P1F 人細胞裂解液 (陽性對照) |
PVRL1 Others Human 人 PVRL1 / HVEC / CD111 / Nectin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) | CD300LG Others Human 人 CLM-9 / EM4 / CD300LG 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CD300C Others Human 人 CD300C / CMRF-35 / IGSF16 人細胞裂解液 (陽性對照) | H1650-M3人非小細胞肺癌細胞 H1650-M3 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS |
成骨細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | 人表皮角質(zhì)形成原代細胞PTGFR: 前列腺素F2a受體抗體PGF2αR 0.2ml |
H9細胞,,人T淋巴細胞系 小鼠胚胎成纖維細胞,3T3 clone A31細胞 人骨骼肌衛(wèi)星細胞cDNAHSkMSC cDNA | 人紅系白血病細胞;TF-1 |
大鼠肺大動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 100mL | ICOS Others Rat 大鼠 ICOS / AILIM / CD278 人細胞裂解液 (陽性對照) |
KLE(人子宮內(nèi)膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 DLL1 / Delta-like 人細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-phospho-IKK gamma (Ser31) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Anti-Phospho-Ret (Tyr905) 0酸化指狀蛋白RET抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml | T24細胞,膀胱移行細胞癌細胞 子宮高分化鱗癌細胞,HCC細胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0908 |
Rhesus antibody Rh Phospho-Lck (Tyr505) 0酸化淋巴細胞特異性蛋白酪激酶抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLK10 10抗體 規(guī)格 0.1ml |
T4 甲狀腺素(T4) 96T | KIRREL3 Others Rat 大鼠 KIRREL3 / NEPH2 人細胞裂解液 (陽性對照) |