化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人表皮黑色素細(xì)胞先蛋白酶消化,、后-膠原酶混合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人表皮黑色素經(jīng)S-100免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人表皮黑色素原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 皮膚組織 |
英文名稱 | Human Epidermal Melanocyte Cells | 貨號(hào) | YS-01X7349 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人表皮黑色素細(xì)胞分離自皮膚組織,；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層,，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用,。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu),，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層,，即基底層,、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層,。黑色素細(xì)胞是皮膚產(chǎn)生和維持色素的主要細(xì)胞,，起源于嵴，后逐漸遷移到表皮和毛囊,。黑色素細(xì)胞的異?；蚬δ艿氖С?dǎo)致了一系列難治性色素性疾病的發(fā)生，如,、黃褐斑等,。表皮黑色素細(xì)胞主要分布于位于表皮的基底層，與表皮細(xì)胞共同組成表皮黑素單位,，其主要功能是產(chǎn)生黑素小體保護(hù)皮膚免受損害,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
雜交瘤(B類);Z172A4C4C6F3G12 | Anti-Telomerase Binding Protein, P23 端粒酶結(jié)合蛋白P23抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Try- II (Human Trypsinogen-2) ELISA Kit 人酶原Ⅱ 96T | Anti-Midnolin isoform Protein 2/FITC 熒光素標(biāo)記中腦核仁蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TLS/FUS 粘液樣脂肪肉瘤蛋白FUS1抗體 規(guī)格 0.2ml | Gzms-A(Human granzymes A) ELISA Kit 人顆粒酶AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
HE4： 附睪分泌蛋白4抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh CCDCA 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白A抗體 規(guī)格 0.2ml |
FBXL16： FBXL16蛋白抗體 0.2ml | FASL ELISA Kit 大鼠凋亡相關(guān)因子配體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
心房成纖維細(xì)胞 (HCFaa)( 5×105 ) | FCGR2B Others Human 人 CD32b / FCGR2B 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5 | PGA4 Others Human 人 PGA4 / Pepsinogen A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
NCI-H661(人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腎上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | TF Others Rat 大鼠 ansferrin / TF 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
TGFBR1 Others Human 人 TGFBR1 / ALK-5 / SKR4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | SK-N-BE(2) (人母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 U937(組織細(xì)胞淋巴瘤) |
成骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人表皮黑色素原代細(xì)胞Gzms-A(Human granzymes A) ELISA Kit 人顆粒酶AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
COS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0182P815(小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 正常大鼠腎細(xì)胞;NRK | CM-R024大鼠淋巴成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
BTC Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 BTC / Betacellulin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) | NB4細(xì)胞,，人急性早幼粒白血病細(xì)胞 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌細(xì)胞,MFC-GFP細(xì)胞 成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM-sf-prf |
PTN Others Mouse 小鼠 Pleioophin / PTN / HB-GAM 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Anti-Phospho-Rb (Ser807/Ser811)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Orexin B： 增食欲素B/欲激素B 0.1ml | SELL Others Mouse 小鼠 SELL / CD62L / L-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
Squalene Epoxidase： 鯊烯環(huán)氧酶抗體 0.2ml | CRHBP： 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素結(jié)合蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Bio 標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml | 心房成纖維細(xì)胞 (HCFaa)( 5×105 ) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)