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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的雞主動(dòng)脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的雞主動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 雞主動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 主動(dòng)脈 |
英文名稱 | Chicken Aortic Smooth Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X8286 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
雞主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自主動(dòng)脈組織,；主動(dòng)脈是體循環(huán)的動(dòng)脈主干,。其運(yùn)行路徑為：升主動(dòng)脈起于左心室，至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動(dòng)脈弓,，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動(dòng)脈,；在第12胸椎體高度穿膈的主動(dòng)脈裂孔移行為腹主動(dòng)脈，以上為胸主動(dòng)脈,，至第4腰椎體下緣分為左,、右髂總動(dòng)脈；髂總動(dòng)脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi),、外動(dòng)脈,。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞在心血管疾病發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用,，以主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,，探討心血管疾病相關(guān)發(fā)病機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn)；體外培養(yǎng)的主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
雞主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
獼猴皮膚細(xì)胞;MMS7 人淋巴胚胎性癌細(xì)胞,，Cates-1B細(xì)胞 MDA-MB-453(癌細(xì)胞) | Orexin A(Human Orexin A) ELISA Kit 人阿立新A 96T |
RASGEF1A： 核苷酸交換因子rasgef1a抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh APC APC標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml |
Anti-HA tag/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記HA tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C16orf57： 16號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框57抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BTBD19 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白19抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CRHR1/CRFR1/FITC 熒光素標(biāo)記促腎上腺皮質(zhì)釋放激素受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
兔抗人鳥(niǎo)苷三0酸酶-發(fā)動(dòng)蛋白2抗體 Anti-Dynamin 2 0.1ml | ATG4D： 自噬相關(guān)蛋白4D抗體 0.2ml |
黑人Butt淋巴瘤細(xì)胞;RAJI | 人腎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
P19細(xì)胞，小鼠畸胎瘤細(xì)胞 MCF7(癌細(xì)胞) 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204 | CCL5 Protein Human 重組人 CCL5 / RAES 蛋白 (His & mucin 標(biāo)簽) |
雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7 | Raw264.7, 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 Mouse |
小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | CL-0026ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1) 膠質(zhì)瘤細(xì)胞,，SHG-44細(xì)胞 W6/32細(xì)胞,，小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 | 雞主動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞C16orf57： 16號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框57抗體 0.2ml |
大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1 | 人細(xì)胞;Hela P10s-11F 大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Promocell C-27417 Preadipocyte Growth Medium KIT, 前脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基套裝 500ml | NCI-H1688(人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IgG/FITC FITC標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.3ml |
Rhesus antibody Rh H1N1 Hemagglutinin 2 甲型流感病毒血凝素抗體 規(guī)格 0.1ml | 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC |
ENTPD2： CD39樣蛋白1抗體 0.2ml | Anti-LIR-6 白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體6抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
A Beta1-40(Mouse amyloid beta peptide 1-40) ELISA Kit 小鼠β淀粉樣蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 黑人Butt淋巴瘤細(xì)胞;RAJI |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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