雞脂肪干原代細胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代骨外膜細胞 NCI-H23(人非小細胞肺癌細胞) NCI-H1688 人典型小細胞肺癌細胞 1ml/T75 QGY-7701, 人肝癌細胞 Human Hacat 人永生化角質(zhì)細胞 大鼠原代外周血粒細胞

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細胞屬性：

方法簡介

實驗室分離的雞脂肪干采用膠原酶消化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的雞脂肪干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不 含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

 

細胞簡介：

雞脂肪干細胞分離自脂肪組織,；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細胞構(gòu)成，聚集成 團 的脂肪細胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉,；貯存的脂肪,，在需要時可迅速分解成甘油和 脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用,。它們影響胰島素敏感性,、血壓水平、內(nèi)皮功能 ,、 纖溶活動及炎癥反應(yīng),，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存 的器官而成為一個極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng),。脂肪干細胞(ADSCs)是一種具有多向分化潛能 的干細胞,，主要恢復組織細胞的修復功能，促進細胞的再生,，恢復年輕面容的同時,，身體 機能也得到充分改善，有效改善亞健康,、早衰等疾病,，由內(nèi)而外真正的有效抵抗衰老。脂 肪干細胞具有很多優(yōu)點：①具有自我更新及多向分化的潛能,；②來源充足,；③對供區(qū)的創(chuàng) 傷較小,；④獲得率及體外擴增速率高,。脂肪干細胞是目前被廣泛應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域中理 想的種子細胞。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS,、EGF、bFGF、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

雞脂肪干細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：