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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的雞腎小管上皮采用篩網過濾,、膠原酶消化法結合差速貼壁法,，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測
公司實驗室分離的雞腎小管上皮經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
產品名稱 | 雞腎小管上皮原代細胞 | 組織來源 | 腎組織 |
英文名稱 | Chicken Renal Tubular Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7034 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
雞腎小管上皮細胞分離自腎組織,；腎臟是機體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內代謝產物及某些廢物,、毒物,，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖,、蛋白質,、氨基酸、鈉離子,、鉀離子,、等，以調節(jié)水,、電解質平衡及維護酸堿平衡,。腎臟同時還有內分泌功能，生成腎素,、促紅細胞生成素,、活性D3,、前列腺素、激肽等,，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能,，保證了機體內環(huán)境的穩(wěn)定,，使新陳代謝得以正常進行。腎小管是機體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管,，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用,。腎小管按不同的形態(tài)結構、分布位置和功能分成近端小管,、髓袢和遠端小管三部分,；近端小管可分為直部和曲部，曲部也稱為近曲小管,，位于皮質迷路內,，于腎小體附近高度蟠曲；遠端小管曲部也稱為遠曲小管,，位于皮質迷路內,。腎小管上皮細胞是腎小管外面的一層細胞，腎小管上皮細胞的分離,、培養(yǎng)是研究腎臟疾病的一項重要技術,，目前該細胞分離方法有酶分離法、化學分離法篩網分離法,、顯微解剖分離法,、流式細胞儀分離法等。腎小管上皮細胞主要功能：①腎小管上皮細胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸,；②排泌非營養(yǎng)物質進入終尿,；③細胞能分泌炎癥介質如細胞因子和趨化因子，通過產生IL-8或直接趨化白細胞參與急性炎癥反應,；④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原,，這說明腎小管上皮細胞參與腎免疫損傷的發(fā)生。隨著對腎間質纖維化機制研究的日漸加深,，腎小管上皮細胞（RTECs）在其中的作用日益被人們重視,。因此，提供良好的腎小管上皮細胞模型,，在腎小管間質疾病的發(fā)病機制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。
公司產品：
中國倉鼠肺細胞;CHL 卵巢癌細胞，NIH:OVCAR-3細胞 L8824細胞,，草魚肝臟細胞 | Rhesus antibody Rh GIP 胃泌素抑制肽抗體 規(guī)格 0.2ml |
MART/Melan-A(Human Melanoma Marker A) ELISA Kit 人黑色素瘤標記物Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗親和素 0.1ml |
Inhibin Alpha： 抑制素A/Inhibin α抗體 0.1ml | VD ELISA Kit 大鼠D 96T |
Rhesus antibody Rh RLBP1L1 結合蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-κOR/FITC 熒光素標記kappa型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TNK1 (Tyr277) 0酸化非受體型酪蛋白激酶Tnk1抗體 規(guī)格 0.1ml | Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白 96T |
人胚皮膚成纖維細胞;CCC-ESF-1 | F344大鼠骨髓間質干細胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells |
HME2細胞,，人黑色素瘤細胞 干酪乳桿菌干酪亞種 人癌細胞;MCF7 | USMC(大鼠血管平滑肌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;HH-16 | 大鼠腦膠質瘤細胞;C6 |
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1 | 間充質干細胞軟骨細胞分化生長添加物MCDS |
RM-1細胞，前列腺癌細胞 人胚胎腸粘膜細胞,CCC-HIE-2細胞 恒河猴腎細胞;RM-2 | 雞腎小管上皮原代細胞VD ELISA Kit 大鼠D 96T |
T-106AIV型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL | RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FSTL1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CSNK2A1 Others Human 人 CSNK2A1 / CK2A1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H012人支氣管平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL |
人腎透明細胞癌;Caki-1 | Rhesus antibody Rh APS APS抗體 規(guī)格 0.1ml |
BTBD17： BTB/POZ結構域蛋白17抗體 0.2ml | NCI-H520 肺鱗癌 |
Anti-RELMa/FITC 熒光素標記抵抗素樣分子α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PPARGC1A： 過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體 0.1ml |
Anti-CD133 Anti-gen/FITC 熒光素標記造血干細胞抗原CD133抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 人胚皮膚成纖維細胞;CCC-ESF-1 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側,，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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