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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的雞腎小管上皮采用篩網(wǎng)過濾,、膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的雞腎小管上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 雞腎小管上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腎組織 |
英文名稱 | Chicken Renal Tubular Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7034 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
雞腎小管上皮細(xì)胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液,，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),，如葡萄糖、蛋白質(zhì),、氨基酸,、鈉離子、鉀離子,、等,，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡,。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能,，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素,、活性D3,、前列腺素、激肽等,，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,，使新陳代謝得以正常進行,。腎小管是機體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細(xì)長上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用,。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu),、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和遠(yuǎn)端小管三部分,；近端小管可分為直部和曲部,，曲部也稱為近曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi),，于腎小體附近高度蟠曲,；遠(yuǎn)端小管曲部也稱為遠(yuǎn)曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi),。腎小管上皮細(xì)胞是腎小管外面的一層細(xì)胞,，腎小管上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)是研究腎臟疾病的一項重要技術(shù),，目前該細(xì)胞分離方法有酶分離法,、化學(xué)分離法篩網(wǎng)分離法,、顯微解剖分離法、流式細(xì)胞儀分離法等,。腎小管上皮細(xì)胞主要功能：①腎小管上皮細(xì)胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸,；②排泌非營養(yǎng)物質(zhì)進入終尿；③細(xì)胞能分泌炎癥介質(zhì)如細(xì)胞因子和趨化因子,，通過產(chǎn)生IL-8或直接趨化白細(xì)胞參與急性炎癥反應(yīng),；④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原，這說明腎小管上皮細(xì)胞參與腎免疫損傷的發(fā)生,。隨著對腎間質(zhì)纖維化機制研究的日漸加深,，腎小管上皮細(xì)胞（RTECs）在其中的作用日益被人們重視。因此,，提供良好的腎小管上皮細(xì)胞模型,，在腎小管間質(zhì)疾病的發(fā)病機制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
中國倉鼠肺細(xì)胞;CHL 卵巢癌細(xì)胞，NIH:OVCAR-3細(xì)胞 L8824細(xì)胞,，草魚肝臟細(xì)胞 | Rhesus antibody Rh GIP 胃泌素抑制肽抗體 規(guī)格 0.2ml |
MART/Melan-A(Human Melanoma Marker A) ELISA Kit 人黑色素瘤標(biāo)記物Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml |
Inhibin Alpha： 抑制素A/Inhibin α抗體 0.1ml | VD ELISA Kit 大鼠D 96T |
Rhesus antibody Rh RLBP1L1 結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-κOR/FITC 熒光素標(biāo)記kappa型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TNK1 (Tyr277) 0酸化非受體型酪蛋白激酶Tnk1抗體 規(guī)格 0.1ml | Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白 96T |
人胚皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-ESF-1 | F344大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells |
HME2細(xì)胞,，人黑色素瘤細(xì)胞 干酪乳桿菌干酪亞種 人癌細(xì)胞;MCF7 | USMC(大鼠血管平滑肌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;HH-16 | 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞;C6 |
中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1 | 間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞分化生長添加物MCDS |
RM-1細(xì)胞，前列腺癌細(xì)胞 人胚胎腸粘膜細(xì)胞,CCC-HIE-2細(xì)胞 恒河猴腎細(xì)胞;RM-2 | 雞腎小管上皮原代細(xì)胞VD ELISA Kit 大鼠D 96T |
T-106AIV型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL | RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FSTL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CSNK2A1 Others Human 人 CSNK2A1 / CK2A1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H012人支氣管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
人腎透明細(xì)胞癌;Caki-1 | Rhesus antibody Rh APS APS抗體 規(guī)格 0.1ml |
BTBD17： BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 0.2ml | NCI-H520 肺鱗癌 |
Anti-RELMa/FITC 熒光素標(biāo)記抵抗素樣分子α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PPARGC1A： 過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體 0.1ml |
Anti-CD133 Anti-gen/FITC 熒光素標(biāo)記造血干細(xì)胞抗原CD133抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 人胚皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-ESF-1 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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